1. 研究目的与意义
内容：本课题组前期研究表明，雷公藤具有广泛治疗作用的同时，也具有肝毒性，且在体内外均可引起肝细胞损伤。结合文献研究发现，对药物代谢过程的影响可能是雷公藤产生毒性的关键所在，而核受体（CAR）代谢酶的协同调控在配伍减毒机制中可能占有重要地位。本研究拟从体内、体外两方面进行雷公藤及其复方（生地、三七、青风藤、僵蚕）配伍的解毒机制研究，探寻雷公藤复方对代谢的调控作用。阐明雷公藤配伍不同功效药物差异调控CAR及CYP450不同亚型而调节雷公藤代谢解毒过程发挥减毒作用的机制，解析复方配伍减毒的科学性。
意义：雷公藤复方为国医大师周仲瑛教授临床应用几十年的经验方，该方具有抗炎镇痛、调节免疫紊乱等疗效，针对类风湿关节炎有良好的疗效，并且临床使用中未出现明显的肝脏毒性。实验研究发现雷公藤通过与不同功效药物配伍可减轻其肝毒性，尤以复方全方组作用明显，说明该方通过不同功效药物之间的合理配伍，发挥相辅相成、相反相制的综合作用，可减轻雷公藤的肝脏毒性。根据本课题组的相关研究及分析，对内外源代谢过程的影响可能是雷公藤产生毒性的关键所在，而核受体代谢酶协同调控作用在其肝毒性的发生与发展过程中可能起着重要作用。配伍药物可能通过对代谢酶之间的协同作用，或者是通过核受体之间的协同调控，影响雷公藤的代谢解毒过程，发挥协同解毒的效应。本课题的研究成果可初步阐明雷公藤复方配伍减毒的作用机制，为配伍减毒效应研究提供思路和借鉴，进而为雷公藤临床安全用药提供依据。
2. 文献综述
核受体在药物代谢中的作用
沈家敏 042011224 药学112
摘要 核受体是一种配体依赖性转录因子，体内分布广泛, 经配体激活后可调控药物代谢酶及转运体的表达和活性, 影响药物在体内的处置，在外源性物质和内源性物质的代谢中具有重要作用。本文主要对核受体的结构、特性做简要介绍，重点综述了核受体对i/ii相代谢酶的作用，尤其是pxr，car，ppar，fxr四类核受体在药物代谢中的作用和机制。
3. 设计方案和技术路线
研究方案 1 雷公藤不同配伍对大鼠肝组织核受体及代谢酶的影响 （1）雷公藤不同配伍对解毒酶相关核受体的影响 SD大鼠，雷公藤单药、复方及不同配伍组分别给药一个月，取肝组织检测解毒酶相关的核受体(CAR)转录与表达的变化。 （2）雷公藤不同配伍对I相代谢酶的影响 SD大鼠，雷公藤单药、复方及不同配伍组分别给药一个月，观察雷公藤不同配伍对I相（P450酶及其亚型）代谢酶转录与表达的影响。 2 雷公藤不同配伍对肝细胞(LO2)核受体及代谢酶的影响 （1）配伍后雷公藤代谢调控的变化采用LO2细胞体外培养，制备雷公藤单药、复方和不同配伍的含药血清，加入细胞中作用一定时间后，检测分析雷公藤不同配伍对解毒酶相关的核受体(CAR)转录与表达的影响。 （2）配伍对雷公藤诱导的Ⅰ相代谢酶的影响采用LO2细胞体外培养，制备雷公藤单药、复方和不同配伍的含药血清，加入细胞中作用一定时间后，检测分析雷公藤不同配伍对I相（P450酶及其亚型）代谢酶转录与表达的影响。研究方案 1 雷公藤不同配伍对大鼠肝组织核受体及代谢酶的影响 （1）雷公藤不同配伍对解毒酶相关核受体的影响 SD大鼠，雷公藤单药、复方及不同配伍组分别给药一个月，取肝组织检测解毒酶相关的核受体(CAR)转录与表达的变化。 （2）雷公藤不同配伍对I相代谢酶的影响 SD大鼠，雷公藤单药、复方及不同配伍组分别给药一个月，观察雷公藤不同配伍对I相（P450酶及其亚型）代谢酶转录与表达的影响。 2 雷公藤不同配伍对肝细胞(LO2)核受体及代谢酶的影响 （1）配伍后雷公藤代谢调控的变化采用LO2细胞体外培养，制备雷公藤单药、复方和不同配伍的含药血清，加入细胞中作用一定时间后，检测分析雷公藤不同配伍对解毒酶相关的核受体(CAR)转录与表达的影响。 （2）配伍对雷公藤诱导的Ⅰ相代谢酶的影响采用LO2细胞体外培养，制备雷公藤单药、复方和不同配伍的含药血清，加入细胞中作用一定时间后，检测分析雷公藤不同配伍对I相（P450酶及其亚型）代谢酶转录与表达的影响。
技术路线：见附件
4. 工作计划
3.13.4：文献检索与查阅 3.53.9：准备开题报告 3.105.15：采用体内外实验，研究雷公藤及其配伍核受体及I相代谢酶的影响 5.165.30：整理数据，撰写毕业论文
5. 难点与创新点
核受体可诱导多种代谢酶的转录，对药物代谢靶基因的表达具有重要作用，对临床治疗药物的代谢动力学、药物相互作用以及毒物的代谢及消除等也具有重要的影响。
核受体-代谢酶对雷公藤代谢的协同调控尚未有系统的研究，深入研究其调控机制可能有利于从分子水平揭示雷公藤肝毒性的机制。
而从核受体-代谢酶角度进行复方配伍减毒机制的研究可有利于阐明其组方配伍异类相制的分子生物学基础。
