1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题意义：应用基因组学和生物信息学方法挖掘和筛选单增李斯特菌不同血清型特异性靶点基因片段，利用设计出的特异性引物，建立单增李斯特菌主要血清型的pcr及多种血清型同时检测的方法。然后将其应用于食品中的单增李斯特菌血清型的快速检测。本研究的意义就是建立单增李斯特菌主要血清型的分子生物学检测方法，为今后单增李斯特菌感染的控制、李斯特菌病的诊断和流行病学调查提供理论依据和技术支持。
国内外研究概况：美国、欧盟等发达国家对微生物快速检测方法的研究和产品认证体系相对成熟，各种不同的快检系统和自动化仪器被推出，并得到广泛的应用。当前，李斯特菌快速检测方法为增菌以后，生化鉴定之前，对样本进行快速筛选，以缩小检测范围，减少检测任务，提高检测效率。快速检测方法主要包括酶底物显色技术、免疫学和分子生物学检测三大类。我国在微生物快速检测技术的应用及技术研发方面相对欧洲国家比较落后，快速检测技术的发展和应用需要政府相关机构、科研单位、企业共同的努力建立一套快速、准确、简单的检测体系，此外，还需要降低检测成本，提供检测灵敏度和实用性，这些是今后微生物快速检测的发展趋势。
应用前景：随着学科的交叉，食源性致病菌的检测一方面向综合的方向发展， 即集多种技术于一体的多功能、全自动化大型检测仪器不断出现；另一方面， 针对单个菌种和菌属的新型培养基、免疫试剂盒和分子试剂盒也会不断推向市场。从技术角度来说，对于单增李斯特菌的快速检测，新型鉴定培养基、免疫学检测和分子检测仍然是3条主线。无论是从那个角度,未来检测的方向都是向着更快捷、更精确、更灵敏的方向发展。相信随着对单增李斯特菌的全方位深入了解和认识，更完美的检测工具会不断出现。
2. 研究的基本内容和问题
研究内容：应用基因组学和生物信息学方法挖掘和筛选单增李斯特菌不同血清型特异性靶点基因片段，利用设计出的特异性引物，建立单增李斯特菌主要血清型的pcr及多种血清型同时检测的方法。
研究目标：将建立的方法应用于食品中的单增李斯特菌血清型的快速检测。本研究的目标就是建立单增李斯特菌主要血清型的分子生物学检测方法，为今后单增李斯特菌感染的控制、李斯特菌病的诊断和流行病学调查提供理论依据和技术支持。
拟解决的关键问题：应用分子生物学方法对食品中的单增李斯特菌检测，虽然具有一定的高效性、特异性强，步骤简单等特点，但在实际操作中仍然存在很多不足之处，如：a.靶基因的选取以及设计引物是否合适都会影响pcr的扩增结果，往往会出现非特异性条带；b.食品中的糖类、盐类、以及有机成分都会干扰pcr扩增结果，经常会有假阴性或假阳性结果出现；c.对于已经死亡的微生物，经常会被作为活菌检测出来，直接影响检测结果。
3. 研究的方法与方案
研究方法：应用基因组学和生物信息学方法挖掘和筛选单增李斯特菌不同血清型特异性靶点基因片段，设计出特异性引物，建立单增李斯特菌主要血清型的pcr及多种血清型同时检测的方法。
技术路线：应用基因组学筛选特异性靶基因片段→设计特异性引物→验证引物→灵敏性、特异性分析→建立方法
实验方案：首先应用基因组学和生物信息学方法筛选单增李斯特菌不同血清型特异性靶点基因片段，然后设计出特异性引物，最后利用多重pcr方法检测单增李斯特菌几种常见血清型。
4. 研究创新点
应用基因组学和生物信息学方法挖掘和筛选单增李斯特菌不同血清型特异性靶点基因片段，设计特异性引物，最终利用多重PCR方法检测单增李斯特菌几种常见血清型。
5. 研究计划与进展
研究计划：（1）筛选单增李斯特菌不同血清型特异性靶点基因片段；（2）设计特异性引物；（3）建立多重PCR方法检测单增李斯特菌几种常见血清型。
预期进展（包括论文）：（1）2015年10月~2016年1月完成筛选及引物的设计；（2）2016年3月完成单增李斯特菌几种常见血清型的检测；（3）2016年4月~2016年5月完成论文撰写及答辩。
