1. 研究目的与意义
癌症严重危害人类的健康，长期以来，虽然大量的抗肿瘤药物问世，但癌症的复发率、死亡率以及药物耐药性依然居高不下。近年来，随着靶向药物的问世，给广大癌症患者带来了新希望。但是，目前问世的靶向药物往往价格高昂，难以为广大人们群众所承受。因此，找寻开发高效的抗肿瘤活性成分成为研究热点和重点。
大量研究报道证实部分人参内生菌具有抗肿瘤活性。秦建春等人研究发现人参内生球毛壳菌株rsqmk-9的次生代谢产物5’-epichaetovirdin a具有抗肿瘤活性。田义新等人发现两种人参内生真菌——gs-4和gs-22的乙酸乙酯粗提物对人宫颈癌hela细胞具有抑制作用，ic50达到60-140ug/ml，这两种真菌分别属于半裸镰刀菌和半球菌。秦路平等人发现五种人参内生菌对胃癌、肠癌、肝癌等细胞具有较好的体外抑制能力。这些研究说明人参内生菌次生代谢产物在抗肿瘤天然产物开发和应用领域具有巨大的潜力和空间。因此，本论文旨在以人参内生假单胞杆菌g13476的次生代谢产物为材料，以肺癌a549为对象，检测分析其抗肿瘤效果和作用机制。
本论文采用mtt、流式细胞术、westernblot等方法，以a549细胞对受测细胞。mtt检测对细胞增殖影响，流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响，westernblot检测凋亡相关因子bcl-2、bax等的蛋白含量变化，erk1/2、akt、p65等蛋白的磷酸化水平变化。分析研究g13476次生代谢产物抗肿瘤效果和机制。本论文将为内生菌来源的天然产物抗肿瘤相关研究提供新思路，为拓展优势药用植物的新应用做出贡献，本项目既具有重要的学术理论意义又有广阔的应用前景。
2. 研究内容和预期目标
本论文的主要研究内容如下：
1、乙酸乙酯萃取获得g13476次生代谢产物粗提物；
2、mtt检测对细胞增殖的抑制效果和给药刺激浓度及时间；
3. 研究的方法与步骤
1、采用乙酸乙酯萃取g13476次生代谢产物；
2、mtt检测g13476次生代谢产物对a549增殖的影响；
3、流式细胞术检测g13476次生代谢产物对a549细胞周期的影响；
4. 参考文献
1.shan x, fu ys, aziz f, et al. ginsenoside rg3 inhibits melanoma cell proliferation through down regulation of histone deacetylase 3(hdac3) and increase of p53 acetylation. plos one. 2014, 9(12): e115401.
2.waterman c, calcul l, beau j, et al. miniaturized cultivation of microbiota for antimalarial drug discovery. med res rev. 2014, doi:10.1002.
3.潘晓曦, 关一鸣, 张舒娜, 等. 人参内生菌研究现状与展望. 人参研究. 2014，26(3):52-5.
5. 计划与进度安排
2022-2022-1学期第17-20周-2022-2022-2学期
第1-2周（2022.12.20-2022.3.10）查阅文献，完成开题报告的撰写；
第3-4周（2022.3.11-2022.3.24）细胞培养，药物刺激，mtt检测；
