1. 研究目的与意义
癌症严重危害人类的健康,长期以来,虽然大量的抗肿瘤药物问世,但癌症的复发率、死亡率以及药物耐药性依然居高不下。近年来,随着靶向药物的问世,给广大癌症患者带来了新希望。但是,目前问世的靶向药物往往价格高昂,难以为广大人们群众所承受。因此,化疗仍为肿瘤治疗的首选方案之一,但毒副作用和耐药性导致化疗治愈效果较不理想。因此,从天然产物中找寻辅助化疗成分成为研究热点和重点。
苍术是一种传统中药,药用历史久远,具有润脾、祛湿等作用功效。近年来,大量的药理和天然产物研究显示:苍术具有抗肿瘤活性。茅术醇,属螺环倍半萜类化合物,主要存在于苍术、白术等中草药中,是其重要的挥发油成分之一。苍术、白术均为传统中草药,药用历史悠久,近年来在抗肿瘤临床中也被大量使用,如白术配方药物:参苓白术散、扶正固本汤等。体内动物模型中,同样证实苍术和白术的抗肿瘤活性。na-bangchang等人在胆管癌小鼠模型中证实苍术的抗肿瘤增殖活性;白术挥发油提取物可有效抑制小鼠h22肝癌血道的转移。天然产物化学相关研究显示:苍术、白术的抗肿瘤活性主要来自于其挥发油成分,如茅术醇、苍术内酯等。苏小梅等研究发现苍术内酯Ⅰ在肺癌a549细胞中通过上调caspase-3和9、降低bcl-2和bcl-x的表达,促进细胞凋亡,实现肿瘤抑制;苍术内脂Ⅱ在黑色素瘤细胞b16中通过抑制akt和erk磷酸化诱导细胞周期阻滞于g1期,进而实现凋亡。最新报道显示苍术内酯i通过靶向md-2蛋白,抑制tlr4/myd88通路,进而增强紫杉醇的化疗敏感性,改善紫杉醇的耐药现象。
本论文旨在以苍术粗提物联合化疗药物紫杉醇为实验组分,以肝癌化疗耐药细胞株bl6/fu为对象,mtt检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,western blot检测bcl-2、bax等凋亡相关蛋白表达变化。本论文将为茅苍术的活性成分抗肿瘤相关研究提供新思路,为拓展优势药用植物的新应用做出贡献,本项目既具有重要的学术理论意义又有广阔的应用前景。
2. 研究内容和预期目标
研究内容:
1、采用有机溶剂回流、微波等提取方法获得茅苍术粗提物;
2、mtt检测提取物联合紫杉醇对细胞增殖的抑制效果和给药刺激浓度及时间;
3. 研究的方法与步骤
1、采用有机溶剂回流、微波等提取方法获得茅苍术粗提物,环己烷、乙酸乙酯等溶剂进行萃取,浓缩;
2、mtt检测提取物联合紫杉醇对bl6/fu增殖的影响;
3、流式细胞术检测提取物联合紫杉醇对bl6/fu细胞周期的影响;
4. 参考文献
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[2]guo h, liu jx, xu l, etal. traditional chinese medicine herbal treatment may have a relevant impact onthe prognosis of patients with stage iv adenocarcinoma of the lung treated withplatinum-based chemotherapy or combined targeted therapy and chemotherapy.[j].integrative cancer therapies, 2011, 10(2):127.
[3] 赵晖. 十全大补汤及其变方的hplc分析及抑制肿瘤转移作用[j]. 国际中医中药杂志, 2000,22(3):175-176.
5. 计划与进度安排
第1-2周查阅文献,完成开题报告的撰写;
第3-4周 对苍术进行粗提;
第5-7周细胞培养,药物刺激,mtt检测;
