冷藏对枇杷果皮保护酶的效应分析开题报告

3.1材料：

以苏州本地白沙枇杷和红沙枇杷的果实为研究材料

3.2处理方法：

白沙枇杷和红沙枇杷的果实，通过冷藏处理（6℃），直至出现明显的冷藏伤害。

3.3方法：

（1）以常温存放（25℃）的枇杷果实为对照

（2）丙二醛MDA含量测定采用硫代巴比妥酸法，以mmol/g表示。丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基恶唑-2，4。二酮)，其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3 的终浓度为0．5umol·L-1。

（3）氧自由基产生速率采用羟胺法测定，以umol/(min.mg)表示。在生物体中，氧作为电子传递的受体，得到单电子时，生成超氧阴离子自由基（O2－）。利用羟胺氧化的方法可以测定生物系统中O2－含量。O2－与羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成粉红色的偶氮染料（对－苯磺酸－偶氮－α－萘胺）。取生成物在530nm波长处测定吸光度（A）值，根据A530值可以算出样品中O2－含量。

（4）过氧化物酶POD活性采用愈创木酚法测定，以每分钟D_470nm升高0.01为一个活力单位（U），以U/mg酶蛋白表示其酶活性。在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470 nm处有最大光吸收值，故可通过测470 nm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。

（5）超氧化物歧化酶SOD活性采用邻苯三酚自氧化法测定，以每分钟邻苯三酚自养化速率抑制50%为1个活力单位（U），以U/mg酶蛋白表示其活性。在碱性条件下, 邻苯三酚迅速氧化释放出超氧化物阴离子，生成有色中间产物，吸光度随之增加，使吸光度值与反应时间呈良好的线性关系. SOD 加入邻苯三酚自氧化反应体系后，催化超氧化物阴离子生成过氧化氢，使有色中间产物的生成受阻，导致吸光值下降，邻苯三酚自氧化速率降低，可作为测定 SOD 活性的理论依据.

（6）过氧化氢酶CAT活性采用紫外吸收法测定，以每分钟D_240nm降低0.1为1个活力单位（u），以U/mg酶蛋白表示其活性。H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

其中，粗酶液蛋白质含量按考马斯G-50法测定，以牛血清蛋白为标准，以mg/g表示，每个样品取3次生物学重复，以平均值进行统计分析，利用Excel软件作图。

[1] 刘丰娇, 蔡冰冰, 孙胜楠,等. 富氢水浸种增强黄瓜幼苗耐冷性的作用及其生理机制[J]. 中国农业科学,2017, 50(5):881-889.

[2] 曲弨琪, 满秀玲, 段亮亮. 低温胁迫对约书亚树幼苗叶片生理生化指标的影响[J]. 东北林业大学学报,2013, 41(2):1-5.

[3] 王小丽, 裴玉贺, 郭新梅,等. 低温胁迫下玉米幼苗的几种生理生化指标的变化[J]. 植物生理学报,2009, 45(5):487-490.

[4] 姜华武, 张祖新. 淹水对玉米根系几种酶活性的影响[J]. 湖北农学院学报, 1999(3):209-211.

[5] 刘晓忠, 汪宗立, 高煜珠. 涝渍逆境下玉米根系乙醇脱氢酶活性与耐涝性的关系[J]. 江苏农业学报,1991(4):1-7.

[6]Chen X B, Qi T, Zhang L P, et al. Influences of different transmittance andwater contents in soil on branch increment and some physiological indexes inleaf of Sinocalycanthus chinensis.[J]. Journal of Plant Resources Environment, 2010, 19(4):70-77.

[7]Song H W, Yuan W M, Jin P, et al. Effects of chitosan/nano-silica onpostharvest quality and antioxidant capacity of loquat fruit during coldstorage[J]. Postharvest Biology and Technology, 2016, 119: 41-48.

[8]Shao X, Kang T. Hot Air Treatment Improved the Chilling Resistance of LoquatFruit under Cold Storage[J]. Journal of Food Processing Preservation,2014, 38(2):694-703.

[9] 林建城, 林河通, 郑红,等. 采后枇杷果皮细胞壁代谢和果实超微结构与贮藏性的关系[J]. 热带作物学报,2014, 35(1):166-171.

[10] 林建城，林河通，郑红，等．采后枇杷果皮细胞壁代谢和果实超微结构与贮藏性的关系[J]．热带作物学报，2014，35（1）：166-171．

[11] O'Brien J A, DaudiA, Butt V S, et al. Reactive oxygen species and their role in plant defenceand cell wall metabolism[J]. Planta, 2012, 236(3):765.

[12] Cao S F, Zheng YH, Wang K T, et al. Effect of 1-Methylcyclopropene treatment on chillinginjury, fatty acid and cell wall polysaccharide composition in loquatfruit[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009, 57(18):8439-8443.

[13] Cai C, Chen K S,Xu W P, et al. Effect of 1-MCP on postharvest quality of loquat fruit[J].Postharvest Biology Technology, 2006, 40(2):155-162.