1. 研究目的与意义
银耳（tremellafuciformis），又称白木耳，雪耳，属于有隔担子菌亚纲银耳科，是一种广受人们喜爱的食用菌。其属于真菌类银耳科银耳属，是门担子菌门真菌银耳的子实体，有“菌中之冠”的美称。银耳子实体纯白至乳白色，直径5～10厘米，柔软洁白，半透明，富有弹性。银耳味甘、淡、性平、无毒，既有补脾开胃的功效，又有益气清肠、滋阴润肺的作用。既能增强人体免疫力，又可增强肿瘤患者对放、化疗的耐受力。银耳富有天然植物性胶质，外加其具有滋阴的作用，是可以长期服用的良好润肤食品。同时，银耳也是世界公认的珍贵药材，其主要有效成分银耳多糖（tremella fuciformis polysaccharides，tfp）是一种酸性杂多糖，从银耳子实体中得到的，其主链结构是由α-(1→3)糖苷键连接的甘露聚糖，支链由葡萄糖醛酸和木糖组成。存在于银耳深层发酵孢子体中的酸性杂多糖，主链结构与上述相似，仅在支链上有所区别，具有调节免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖血脂、抗凝血血栓、抗溃疡、促进蛋白质合成、抗病毒，同时具有促进神经细胞生长及改善记忆力等多方面的生物活性。银耳多糖为担子菌多糖类免疫增强剂，有改善机体免疫功能及提升白细胞的作用。实验研究表明，银耳多糖能显著提高小鼠网状内皮细胞的吞噬功能，对环磷酰胺所致的大鼠白细胞减少有预防和治疗作用。临床用于肿瘤化疗或放疗所致的白细胞减少症和其他原因所致的白细胞减少症，有显著效果。此外还可用于治疗慢性支气管炎，有效率达80%以上。从银耳子实体、深层发酵液等部位可提取、纯化得到tfp。
通过改造菌种和优化培养基可以提高食用菌多糖的产量，而优化提取方案可以提高多糖的提取效率，保证食用菌胞内多糖被尽量完全的提取出来。食用菌多糖的提取方法很多，有水溶醇沉法、复合酶解法、超滤法、超声波辅助浸提法、微波辅助浸提法等。传统的热水浸提法虽然是提取多糖的常用方法，操作简单，但时间长、效率低、能耗大；而利用复合酶解法、微波辅助法、超声波辅助法等可以提高提取率、减少能源消耗、缩短提取时间，但对食用菌多糖的结构及生物活性是否有破坏，仍有待进一步的探讨。因此，探索更为高效、经济、可靠的提取方法对银耳多糖的研究开发具有现实意义。
酶技术是近年来广泛应用的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等非目的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。酶提法的优势越来越受到研究人员的关注，因此有众多关于各种酶在多种植物多糖提取中的应用的报道。此外，新酶的开发利用也有着广阔的前景。单一酶法是指仅用一种酶来辅助提取食用菌多糖，提高多糖提取率。常用的酶包括蛋白酶、纤维素酶和果胶酶等。蛋白酶可破坏连接蛋内质的肽键，水解细胞中游离蛋白质，破坏其空间结构，使其变得松散。马利雅等研究了酶解法对离褶伞菌丝体胞内多糖的提取效果，参试的6种酶中，即溶壁酶、中性蛋白酶、酸性蛋内酶、蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶，溶壁酶降解菌丝体细胞壁的能力最强，多糖的提取效率最高，提取的胞内粗多糖产量可达63.2mg/g干菌丝体，比不添加酶的对照提高459.3%。复合酶法：使用2种以上的酶对多糖进行提取，多采用一定比例的蛋白酶、纤维素酶1和果胶酶进行酶解。复合酶法的提取条件温和，提取率通常比单一酶法高。且杂质较易除去，能源消耗低。沈爱英等采用由纤维素酶，果胶酶和蛋内酶按一定比例组成的复合酶，对姬松茸子实体在45摄氏度酶解40min，然后升温至85度热水浸提，多糖提取率为15.67%，所需时间为单纯热水浸提的一半，而提取率明显高于水浸提，也高于酸、碱浸提。
2. 研究内容和预期目标
（1）利用单因素实验确定最佳的提取次数，利用plackett－burman设计考察酶浓度、酶解温度、酶解时间、水浴温度、水浴时间、料液比、ph等因素对多糖提取率的影响，通过模型分析找寻较重要因素。
（2）利用爬陡坡试验，以试验值变化的梯度方向为爬坡方向，根据因素效应值大小确定变化步长，快速逼近最优区域。
（3）利用box－behnken设计确定最佳的提取条件。
3. 研究的方法与步骤
1、 提取过程：
取脱脂肪的子实体干粉→加入蒸馏水→酶法提取→离心(4500r/min，15min)取上清液→测定多糖含量，计算多糖得率。
4. 参考文献
[1]陈飞飞,蔡东联.银耳多糖的主要生物学效用研究进展[j].中西医结合学报,2008,6(8):862-866.
[2]暴悦梅,陈仁绍.银耳多糖的保健作用及应用前景[j].食品研究与开发,2009,30(10):137-138.
[3]马素云,贺亮,姚丽芬.银耳多糖结构与生物活性研究进展[j].食品科学,2010,31(23):411-416.
5. 计划与进度安排
（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022.12.25~2022.3.18）：查阅资料，准备开题报告，外文论文翻译，银耳干燥打粉过筛；
（2）第3周~第4周（2022.3.19~4.1）：预实验，练习多糖测定方法和酶提取法，单因素实验确定最佳提取次数；
（3）第5周~第7周（2022.4.2~4.22）：利用plackett－burman设计从酶浓度、酶解温度、酶解时间、水浴温度、水浴时间、料液比、ph等因素中选出对多糖提取率影响最主要的因素，再通过爬陡坡试验确定这些主要因素的最优区域；
