1. 研究目的与意义
背景：hubiquitin是一种76个氨基酸残基的高度保守的热稳定的小分子蛋白质，分子量大约8500。它的主要功能是标记需要分解掉的蛋白质，使其被26s蛋白酶体降解。26s蛋白酶体上调节亚基上的一些受体可以识别k48和k11位连接的多聚泛素化蛋白，20s核心亚基在atpase供能下水解底物。泛素也可以标记跨膜蛋白，参与蛋白质的膜泡运输。非典型泛素链在细胞信号传导，内吞，以及dna损伤修复，调控nf-kb通路中起着重要作用。它在真核生物中具有高度保留性，人类和酵母的泛素有96%的相似性。它最初从牛胸腺分离，随后发现存在于所研究的所有组织的细胞中，包括动物、酵母、细菌和高等植物。核内和胞质中均存在，因其极为广泛的分布而得此名。
目的：以人类泛素家族蛋白hubiquitin为研究对象，对该基因进行体外扩增，将该基因剪切后插入载体中转入大肠杆菌，在大肠杆菌中进行表达。
意义：本课题的实验有助于我们对人类泛素家族蛋白的理解，让我们认识范素蛋白hubiquitin的作用和功能。通过这个实验，我们可以更深入的了解dna的扩增技术，外源基因转入受体细胞的转化过程等一系列有关基因工程、分子生物学的科学知识。
2. 研究内容和预期目标
本实验属于分子生物学中的基因重组内容，以人类泛素家族蛋白ubiquitin为研究对象，对该基因进行体外扩增，将该基因剪切后插入载体中转入大肠杆菌，在大肠杆菌中进行表达的过程。因此该实验包括目标基因的获取以及目标基因的扩增和重组表达，因此具体可以概括为以下几个方面的内容： 1.查找文献，确定细胞中所要研究的蛋白序列2.根据蛋白序列和所需要的载体序列设计蛋白质的引物序列 3.提取基因组，利用酵母基因组进行目标序列的扩增4.纯化目标序列，将目标序列插入载体中 5.将重组的质粒转入到大肠杆菌中进行表达
本实验的预期目标是将目的基因转入大肠杆菌中并成功表达。
3. 研究的方法与步骤
本课题采用的是实验的方法，实验法是通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果联系的一种科研方法。
具体步骤是：
首先查阅相关文献确定hubiquitin的基因序列。
4. 参考文献
1 pcr技术操作和应用指南。人民军医出版社，1993.
2 吴乃虎.“基因工程原理第二版上册”（1999）.
3 吴乃虎.“琼脂糖凝胶电泳。”遗传工程1（1983）：0.8.
5. 计划与进度安排
（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-25~2022-3-16），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译； （2）第3周~第6周（2022-3-19~4-13），设计引物、选择合适酶切位点、质粒抽提、细胞培养等实验、初步设计；（3）第7周~第11周（2022-4-16~5-18），目标基因扩增、剪切、载体连接、转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子的细胞表达等（4）第12周~第14周（2022-5-21~6-8），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图（5）第15周~第16周（2022-6-11~6-19），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。
