1. 研究目的与意义
过敏性疾病被世界卫生组织列为21 世纪重点防治的3 大疾病之一, 是当前世界性的重大卫生学问题,世界各国过敏反应性疾病的总发病率高达10% - 30% , 此类型疾病包括食物过敏、过敏性哮喘和过敏性鼻炎等, 是临床上的常见病、多发病。食物中能使机体产生过敏反应抗原分子称为食物过敏原, 它们大多为蛋白质。食物过敏是指人体摄入食物中某种成分，即变应原或过敏原后，机体对之产生的异常免疫反应，导致机体生理功能的紊乱或组织损伤，进而引发的一系列临床症状。 据估计，全世界有5%-8%的儿童和1%-2%的成人患食品过敏性疾病。对3941名中国医科大学学生（15-25岁）的调查显示，约有6%的人曾有食物过敏史，果实是十类主要致敏食物之一。正常人群肠道内会形成一套复杂的免疫机制，可以区分病原微生物和无害的食物和共生菌的成份，从而避免免疫不良反应的发生，同时，粘膜免疫体系通过分泌抗体（如二聚体iga和五聚体igm）和炎症耐受机制保护上皮屏障功能，其中iga承担了大部分的=排斥抗原（运输抗原穿过肠道壁到达肠脏）的功能。食物过敏是以免疫球蛋白e（ige）为介导的对一些一般来讲无毒性的过敏原（绝大多数为蛋白质）的超敏反应。
根据临床观测和网上搜索，吃桃引发的过敏反应有两种，一种是口腔过敏综合症，另一种是全身系统性皮肤和肠胃反应及个别休克现象。表皮有毛的桃品种更易引起过敏反应，接触桃毛或盛花期花粉也易引起过敏反应。目前已经对桃果实中过敏原的鉴定和分子克隆进行系统研究，桃果实中的ltp蛋白的晶体结构也确定，目前genebank已登录桃果实四类过敏原编码基因序列，包括4个病程相关蛋白-10（pr-10）基因、4类甜蛋白（ltp）基因、3个脂质转移蛋白（ltp）基因和2个抑制蛋白（profilin）基因。
目前在食物过敏原研究中用到的主要是天然过敏原的提取物，然而天然提取物存在许多不能克服的缺点。首先，在提取过程中，致敏组分与非致敏组分同时存在，导致提取物中组分复杂，难以制备高纯度的单一过敏原；第二，许多 实验表明，提取物中引起过敏症状的致敏原不仅含量不足，而且含量、生物学活性因厂家、批次不同，致使过敏原很难标准化、不具有可比性，不仅不利于食物过敏原的检测，也很难找到与特异性ige抗体相对应的过敏原；第三，天然过敏原提取物在加工提取和贮藏的过程中，其中固有的酶也能导致蛋白降解，导致其生物学活性降低。
2. 研究内容和预期目标
本论文研究主要内容如下：（1）通过在ncbi上查找桃子prup1的基因序列，构建重组质粒 pet21a-prup1
（2）重组质粒 pet21a-prup1转化进入大肠杆菌bl21（de3）感受态细胞；
（3）镍柱进行亲和纯化重组prup1蛋白；
3. 研究的方法与步骤
| 研究方法： 采用His-Tag标签构建pET21a-Prup1重组质粒；采用镍柱亲和层析纯化蛋白；采用BCA法进行蛋白定量；采用SDS-PAGE进行蛋白分子量鉴定；采用Dot blotting进行蛋白功能鉴定。 实验步骤： （1）pET21a-Prup1转化进入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞； （2）镍柱进行亲和纯化重组Prup1蛋白； （3）用桃子过敏阳性血清进行Dot blotting鉴定。 （4）计算汇总所得数据，参考相关文献，对数据进行分析。 |
4. 参考文献
[1] liu zhi gang, bai yu, ji kunmei, et al. detection of dermatophagoides farinae in the dust of air conditioning filters [j]. int arch allergy immunol.2007，144（1）：85-90[2] 闫浩，邬玉兰，夏立新等.牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建[ j] . 江西师范大学学报：自然科学版，2010，34(3) ：244-248
[3]杨勇，阚建全，赵国华等.食物过敏与食物过敏原[j].粮食与油脂， 2004( 3)：43-45
[4]赵志常，张建军，张皖蓉等.拟南芥 dnaj 蛋白的过量表达对细菌耐盐性的影响[j]. 广西师范大学学报：自然科学版，2010，28(1)：54-57
5. 计划与进度安排
1、2022-12-28～2022-03-10 接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告；
