1. 研究目的与意义
在大自然中存在着一类甾体化合物，而以这些甾体化合物为原料的甾体激素类药物则是临床上不可缺少的，常见的药物。雄甾-4-烯-3,17-2酮简称雄烯二酮（4-ad）则是甾体激素类药物不可替代的中间体。目前，在国内外对甾体药物的需求量是巨大的，因而，我们所要的雄烯二酮就具有广阔的市场前景。
为了探索更加经济，产量高,稳定性高的无油工艺提取甾醇药物中间物4-ad,因此，我们在探索去除甘油，用其他有机溶剂来替代，从而来提高产量，降低其他有毒物质的产量。
此种方法是一个很大的进步，为生产提供了便利。同时在医药、食品、化妆品、农业等领域中应用,是很有前景的一种物质。可以降低工业生产甾体药物的成本,减少环境污染,保护生态环境和植物资源,具有很强的市场竞争力。
2. 研究内容和预期目标
一、了解甾醇药物的物理化学性质；
二、研究有油工艺是如何能溶解甾醇药物的；
三、寻找能够促进甾醇溶于水的促溶剂聚丙二醇，增加甾醇在水中的溶解度，从而能够形成不用加油就能使甾醇、水、分枝杆菌很好的混匀接触；
3. 研究的方法与步骤
1、分枝杆菌的活化、扩培；
2、制备分枝杆菌种子培养基，将分枝杆菌接入种子培养基中于30℃、200r/min下摇床培养；
3、配制50ml含油以及含某促溶剂的发酵培养基中，接入5ml分枝杆菌种子培养基于30℃、200r/min条件下摇床培养88h后，取20ml发酵液用乙酸乙酯以1:1比例萃取发酵液两次；
4. 参考文献
[1]杨英，姜绍通，操丽丽等.双液相系统中生物降解植物甾醇制备雄烯二酮工艺[J].农业机械学报， 2008，39（9）：79-86. [2]张裕卿，王东青.植物甾醇微生物转化制备甾体药物中间体的研究进展[J].微生物学通报，2006， 33(2)：142-146. [3]杨英.菜籽甾醇转化制备雄烯二酮高产菌株的诱变育种[J]食品科学，2009,30(5):145-148. [4]张怀成,王风清，马昱澍等.分枝杆菌转化甾醇产9-羟基雄甾烯酮促进剂的筛选[J].化学与生物工程,2013,30(12):55-58. [5]欧水平,王森,张海燕等.中药液体制剂的关键技术-难溶性成分的增溶方法[J].中国药师,2009, 12(2):239-241. [6]王风清.利用分枝杆菌降解植物甾醇生产雄甾烯酮的研究[D].天津,天津科技大学,2003． [7]陈坚,李寅.发酵过程优化原理与实践[M]．北京：化学工业出版社，2002．3． [8]李金亮,冯霞,刘斌等.聚乙二醇支载水溶性紫杉醇衍生物的合成[J].天津大学学报,2003 ,34 (6):808-801. [9]杜薇.甘草酸对板蓝根冲剂的增溶性[J].中国医院药学杂志,1997,17(7):314一315. [10]崔山风.胡英, 戴义.栅皮素包合物的制备工艺及增溶作用研究[J].中国药师,2006,9(8):701- 702. [11]胡英,陈海靓,梁文权.懈皮素自乳化释药系统的制备和质量评价[J].中国中药杂志,2007,32 (9):805一807. [12] Dogra N, Qazi GN (2001) Steroid biotransformation by different strains of Micrococcus sp. Folia Microbiol 46:17-20. [13] Cabral JMS (2003) Microbial conversion of steroid compounds: recent developments. Enzyme Microb Technol 32(6):688705 [14] Donova M V，Egorova O V．Microbial steroid transformations:Current state and prospects[J]．Applied Microbiology and Biotechnology，2012，94(6)：14231447． [15 ]Stefanov S，Yankov D，Beschko V．Biotransformation of phytosterols to androstenedione in two phase water-oil systems[J]．Chemical and Biochemical Engineering Quarterly，2006，20(4)：421-427． [16] Fernandes P，Marques M，Cabral J M S．Towards fastened development and optimization of production processes anchored in biologicals[J]．2010 BERG Annual Report，Research Highlights，2010：3031． [17] Carla C. C. R. de Carvalho,M. Manuela R.da Fonseca .Solvent toxicity in organic-aqueous systems analysed by multivariate analysis,Bioprocess Biosyst Eng (2004) 26: 361-375. |
5. 计划与进度安排
1、2022-03-01～2022-03-15 分枝杆菌的活化、扩培；
2、2022-03-16～2022-03-19 制备分枝杆菌种子培养基，将分枝杆菌接入种子培养基中于30℃、200r/min下摇床培养；
3、2022-03-20～2022-03-25 配制含油发酵培养基中，接入分枝杆菌种子培养基摇床培养88h后，取样用乙酸乙酯萃取发酵液两次
