1. 研究目的与意义
脂肪酶(lipase，ec3．1．1．3)，又称为三羧酸甘油酯水解酶，是重要的酯键水解酶，其催化分解各种天然脂质，能将甘油三酯催化水解为甘油和脂肪酸。脂肪酶广泛应用于生物能源、食品、化工合成、医药等领域。在微生物界，脂肪酶分布广泛，大多数的微生物都能产生脂肪酶。产脂肪酶菌株是一种重要的工业微生物，但由于结构及性质的多样性、酶的不稳定性、提纯困难、底物的水不溶性等问题，仍需要大量的的研究以促进其在工业化过程中的应用。
目前对细菌脂肪酶研究较少，对于其潜在的应用价值和巨大的市场需求，寻找脂肪酶和新酶种的工业化研究有着十分重大的意义。从自然界中筛选脂肪酶产生菌，得到的野生型菌株，其脂肪酶基因大多都受到宿主菌的调控，脂肪酶表达产量很低，难以满足脂肪酶的规模化工业生产要求。
土壤中蕴含丰富的微生物资源，脂肪酶在微生物中分布广泛，从微生物中筛选出具有新特性和高活力的脂肪酶，是一项非常有意义的工作。本次实验经过初筛培养、富集培养和发酵优化培养，筛选出产脂肪酶活力较高的菌株，并对目标菌株产脂肪酶最佳培养条件进行了初步研究，以期为扩大脂肪酶的生产源提供基础资料。
2. 研究内容和预期目标
土壤作为一个巨大的天然微生物库，这些微生物在自然界的进化中形成了独特的性质和催化能力。绝大多数的化学反应中所需的酶类催化剂，都可以在土壤微生物中发现。土壤微生物易于培养，作为工业开发时，利用廉价易得的复合培养基，可以对土壤微生物进行大规模筛选、培养和长期保藏，简便易行，经济环保。自然界中的生物，无时无刻不在进行着天然筛选，这也形成了不同土壤中微生物所产脂肪酶性能，如稳定性、活力、底物耐受性和选择性等千差万别，因此对土壤中的微生物进行详尽的筛选，发现性能更加优良的菌种，很有必要。
对于土壤微生物的筛选是本论文研究工作的重点。用生物发酵培养的方法对土壤产脂肪酶进行筛选。首先，找到富含目的菌株的土壤，经过初筛和复筛后，选择最优菌株。其次对筛选出的菌株经行了初步鉴定，可以判断出属于革兰氏阳性还是革兰氏阴性。最后对酶活力最高的菌株进行优化培养，筛选出最优发酵培养基组成，为规模化生产提供可能。
3. 研究的方法与步骤
产脂肪酶菌株广泛存在与土壤微生物中，因此选择富含目的菌株的土壤，利用产脂肪酶菌株的特性，以橄榄油作为唯一碳源，采用透明圈法，筛选土壤中含脂肪酶的目的菌株，将含有目的菌株的土壤培养液涂布在含有橄榄油的固体培养基上，培养48h后，观察平板上的透明圈，有透明圈出现的地方，即目的菌株产脂肪酶菌。初筛出来的目的菌株，接种环挑单菌落到富集培养基上，进行富集培养，通过测定酶活以及600nm处的吸光值确定选取最优菌株，并用革兰氏染色法，进行染色，初步鉴定菌株的种类。
通过控制变量的原则，选用不同的氮源、碳源配制液体培养基，检测发酵液的酶活以及在600nm处的吸光值，选择出最优培养基配方。
4. 参考文献
[1]薛静，陶树兴，田泽英，苏蕊，丛寅.脂肪酶产生菌的筛选产酶条件及酶特性研究[j].安徽农业科学，2011，39(15)：88268830.
[2]董明奇，史岩，姜春雷，兰贵红，王杰，戴子茹，曹毅，乔代蓉.脂肪酶高产菌株的筛选及酶学特性研究[j].四川大学学报.2008.vol.45no．4.
[3]赵伟，王俐琼，郑甲，等．产脂肪酶菌株的分离、鉴定及产酶条件优化[j]．湖南师范大学自然科学学报，2010,33（3）:88-92.
5. 计划与进度安排
1、2014年12月8日~2014年12月18日，查阅相关资料，翻译文献资料，了解实验的背景、目的以及研究意义，确定实验方法。
2、2014年12月19日~2014年12月22日，采集实验所需的土壤样品，准备实验所需的仪器和药品。
3、2014年12月23日~2014年12月30日，富集培养土壤目的菌株。
