真菌Hypomyces subiculosus氧甲基转移酶功能研究开题报告

1. 研究目的与意义

氧甲基化修饰对天然产物和药物分子的理化性质和生物活性具有重要影响，它可以改善化合物代谢的稳定性、增强化合物的脂溶性以及提高口服生物利用度等。与化学催化方法相比, 氧甲基转移酶（O-methyltransferases ,OMT）参与的生物催化具有环境友好、反应条件温和、终产物产率高、反应步骤简单以及容易被修饰等特点, 更重要的是不需要繁琐的官能团保护-脱保护操作即可实现高度区域选择性催化。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：将前期克隆得到的真菌丝层菌寄生菌（hypomyces subiculosus）中的氧甲基转移酶hsomt转入酿酒酵母bj5464，获得氧甲基转移酶转化子，对转化子进行发酵培养，饲喂多羟基芳环化合物，使用hplc检测发酵后粗提物，验证氧甲基转移酶的催化特性。

预期目标：运用生物合成的方法，实现在多羟基苯环上添加氧甲基，甲氧基转移酶（o-methyltransferases ,omt）催化活性得以验证。

3. 研究的方法与步骤

(1)质粒富集

1）取1-5ml过夜培养（12-16h）的菌液,加入离心管中，10,000 x g离心1 min。弃培养基，倒扣于吸水纸上吸尽残液。

2）向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl buffer p1，用移液枪或涡旋振荡混匀。

4. 参考文献

1 凌关庭.有"第七类营养素"之称的多酚类物质[j]. 中国食品添加剂, 2000(01):28-37.

2 王媛,殷红, 陈小波,等. 茶多酚抗氧化作用的研究[j]. 安徽农业科学, 2013, 41(3):1232-1235.

5. 计划与进度安排

1、第17周（20-21-1学期）— 第3周（2022年12月28日 — 2022年3月21日）：根据和导师讨论确定的论文题目，大量阅读文献，其中选择10篇以上参考文献（外文1-2篇或以上）进行深入阅读，参照任务书写出开题报告。选择一篇外文（5000字以上，文献内容要结合本研究内容）进行全文翻译。

2、第4周（2022年3月22日 — 2022年3月28日）：在充分调研文献的基础上，制定实验具体实施计划，进行试验研究的前期准备工作（研究步骤中的(1) (2)部分）.

3、第5周-第11周（2022年3月29日—2022年5月16 日）：根据任务内容实施试验，将前期研究中克隆得到的真菌丝层寄生菌（hypomyces subiculosus）中的氧甲基转移酶hsomt转入酿酒酵母bj5464，获得氧甲基转移酶转化子, 对转化子进行发酵培养，饲喂多羟基芳环化合物，使用hplc检测发酵后粗提物，验证氧甲基转移酶的催化特性（研究步骤中的(3) (4) (5) (6) (7)部分）。