环糊精糖基转移酶在毕赤酵母中的高效表达开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1.1 环糊精糖基转移酶的性质、催化机理和结构环糊精糖基转移酶（cyclodextrin glycosyltransferase，cgtase，ec 2.4.1.19）是一种多功能型酶，能催化三种转糖基反应（歧化、环化和耦合反应）和水解反应[1]。

歧化反应是环糊精糖基转移酶的主要反应，该反应先把一个直链麦芽低聚糖切断，然后将其中一段转移到另外的直链受体上，如果底物是淀粉，歧化主要发生在环糊精糖基转移酶催化反应的初始阶段，表现为淀粉糊化液黏度快速下降。

环化反应是环糊精糖基转移酶催化的特征反应，是一种分子内转糖基化反应，原理是将直链麦芽低聚糖上非还原末端的o-4或c-4转移到同一直链上还原末端的o-1或c-1上。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1 本课题研究的主要内容（1）重组菌培养与重组酶的表达：携带环糊精糖基转移酶基因表达质粒的重组甘油菌活化，提质粒，核酸胶验证；重组质粒转化进毕赤酵母gs115并进行遗传霉素抗性筛选，重组酵母菌甘油保藏；重组酶诱导表达后，通过测定酶活及酶学性质相关表征，测定环糊精糖基转移酶在毕赤酵母gs115体内的表达能力。

（2）重组菌培养及表达重组酶，取粗酶液进行纯化实验，离心收集上清液。

将收集到的酶液分级分离后进行后续进一步纯化，并测定蛋白质浓度以及酶学性质。