地衣芽孢杆菌酚酸脱羧酶活性和稳定性分子改造的研究开题报告

 2021-08-08 21:23:27

1. 研究目的与意义

地衣芽孢杆菌酚酸脱羧酶具有耐有机溶剂及底物的特性,具有一定的工业化应用前景,但需要进一步提高其对底物的催化性能和温度稳定性。

本研究拟通过基因工程技术对该酶进行定向\定点进化,以期进一步提高其稳定性和催化活性

2. 国内外研究现状分析

国内研究产α-淀粉酶的菌种比较落后,多集中在地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的诱变改良,以提高其活性.近年来,国内多采用分子生物学的手段和方法对α-淀粉酶基因进行了成功的诱变。

3. 研究的基本内容与计划

(1)通过序列比对和分子模拟技术,找到决定酶催化效率和稳定性的关键区域和氨基酸,通过PCR技术进行定点突变,构建突变体,并实现活性表达;(2)纯化相应的突变体,分析各个突变体的催化活性和温度稳定性

4. 研究创新点

随着分子生物学的发展和研究的深入,基因工程育种技术必将逐步显现出其优越性。

纯化的胞外蛋白酶具有相当的热稳定性。

酶活抑制实验显示edta、铜、钴、镁离子等均可成为其酶活抑制因子;而丝氨酸蛋白酶抑制剂甲基磺酰氟(pmsf)、铁、锰、钡、钙离子等对酶活性没有明显影响;锌则会令之酶活性其部分丧失

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