体外构建突变型肿瘤抑制因子p53及其功能的研究开题报告

1. 研究目的与意义

p53基因是因编码一种分子质量为53 kda 的蛋白质而得名，是一种抗癌基因。

其表达产物为基因调节蛋白( p53 蛋白) ，当dna 受到损伤时表达产物急剧增加，可抑制细胞周期进一步运转，一旦p53 基因发生突变，p53 蛋白失活，细胞分裂失去节制，发生癌变p53作为最重要的抑癌基因之一，与癌症的发生发展联系紧密，大约50%的人类癌症中存在着p53突变。

因此，利用分子生物学技术，体外构建p53 突变体，进一步研究突变的p53的相关功能。

2. 国内外研究现状分析

随着对肿瘤发病机制的研究，越来越多的调控因子被阐明其作用机制，如PSF蛋白与非编码RNA调控肿瘤的发生，p53蛋白参与的细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期阻滞及细胞衰老等。p53自1979年被首次报道以来，就备受关注，有关研究成果在Pubmed上可查到20000余篇。p53作为一种转录因子，其控制细胞周期的启动，许多信号通路都需要p53的参与。近年来，随着研究的深入，已认识到，引起肿瘤形成或细胞转化的p53蛋白是p53基因突变的产物，是一种肿瘤促进因子，它可以消除正常p53的功能，而野生型P53基因是一种抑癌基因，它的失活对肿瘤形成起重要作用。

3. 研究的基本内容与计划

1、文献查阅及资料收集：第1周

2、培养细胞，进行预实验：第2~3周

3、利用体外逆转录、pcr，扩增得到p53全长：第4~6周

4. 研究创新点

p53介导的细胞信号转导途径在调节细胞正常生命活动中起重要作用，p53蛋白主要分布于细胞核浆，能与DNA特异结合，其活性受磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等翻译后修饰调控。正常p53的生物功能好似基因组卫士，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整性。因此，体外构建突变型p53对其结构和功能的研究具有重要的意义。