1. 研究目的与意义
脂肽类抗生素是枯草芽孢杆菌及其相近物种通过非核糖体合成途径合成的一类由亲水性环状短肽头部和长链疏水性脂肪酸尾部组成的次生代谢产物,具有抗菌活性和溶血性能,在医药、农药和工业上具有广泛的应用价值。
脂肽类抗生素根据其合成的基因簇和化学结构的差异可分为表面活性素(surfactin)、伊枯草素(iturin)和泛革素(fengycin)三大家簇。
目前,大多数脂肽类化合物都是由国外研究机构进行了专利申请和知识产权保护。
2. 国内外研究现状分析
脂肽类化合物大多数在几十年前就被分离、鉴定和申请了专利。
随着基因工程技术兴起,这些脂肽类化合物的合成基因簇也被陆续克隆报道和申请了专利。
在伊枯草素家簇,1952年美国科学家申请了mycosubtilin的专利,专利号为2602767;2001年日本科学家申请了iturin a基因簇的专利,专利号为p2001-231561a;2004年德国科学家申请了bacillomycin d基因簇的专利,专利号为wo/2004/111240 a2;在2010年本研究团队也首次克隆报道了脂肽类抗生素bacillomycin l的结构基因簇。
3. 研究的基本内容与计划
研究内容(1)新型脂肽类抗生素启动子区域的扩增,β-半乳糖苷酶基因扩增和表达盒的构建;(2) 表达盒插入到b.subtilis-e.coli穿梭质粒载体,构建重组表达质粒载体;(3) 构建调控基因突变株;(4) 转化至枯草芽胞杆菌bs916和调控基因突变株;(5)新型脂肽类抗生素的高效液相色谱分析;(6) β-半乳糖苷酶酶活力测定。
计划2012.12-2013.01新型脂肽类抗生素启动子区域的扩增,β-半乳糖苷酶基因扩增和表达盒的构建;表达盒插入到b.subtilis-e.coli穿梭质粒载体,构建重组表达质粒载 体;2013.02-2013.04 构建调控基因突变株;转化至枯草芽胞杆菌bs916和调控基因突变株;新型脂肽类抗生素的高效液相色谱分析;β-葡萄糖苷酶酶活力测定。
2013.05 论文的整理与写作
4. 研究创新点
基因簇序列新化学结构新生物活性新
