内切型纤维素酶-木聚糖酶杂合酶的构建及其酶学特性分析开题报告

1. 研究目的与意义

双功能酶在结构上通常是由连接肽将两个功能单位连接而成。

本实验拟采用酶接头法构建内切型纤维素酶-木聚糖酶杂合基因，并在毕赤酵母KM71H中表达，纯化表达产物后进行一系列酶学特性分析。

2. 国内外研究现状分析

国内外的研究者已经能熟练实现两种酶的融合表达，并筛选到了催化效率优于亲本的杂合酶。

浙江大学的陆平构建的β-葡聚糖酶-木聚糖酶双功能酶,除了glu部分的热稳定性不如亲本外，融合酶所有酶学性质均类似于亲本,其中glu部分的催化效率是亲本的4.15倍。

总之构建双功能的杂合酶有着深刻的研究价值和广泛的应用前景。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容如下： 1．将构建好的内切型纤维素酶-木聚糖酶杂合酶在毕赤酵母KM71H中表达； 2．纯化表达产物； 3．对双功能酶的酶学特性进行分析。

实验计划： 2012年2月：查阅文献，了解国内外研究进展及设计实验思路； 2012年3月：将构建好的内切型纤维素酶-木聚糖酶杂合酶在毕赤酵母KM71H中表达，分离纯化产物，对双功能酶的酶学性质进行分析； 2012年4月中旬：重复杂合酶的表达，分离纯化，以及酶学性质的测定； 2012年5月上旬：毕业论文的撰写。

4. 研究创新点

（1）利用酶接头法构建内切型纤维素酶-木聚糖酶杂合酶；（2）通过对融合酶的酶学性质进行测定分析，寻找合适的天然底物，实现融合酶的双功能。