1. 研究目的与意义
木聚糖酶含有催化活性区域,有时还含有非催化活性结构域,促进酶与底物结合,特别是与不溶底物的结合及降解,称为碳水化合物结合结构域(cbm)。
本实验室克隆表达的木聚糖酶只含有催化活性区域,实验拟采用酶接法构建含有不同家族cbm的木聚糖杂合酶,进而比较分析不同家族的cbm对木聚糖酶酶学性质的影响。
为木聚糖酶的优化改造提供理论依据。
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2. 国内外研究现状分析
木聚糖酶的稳定性除了与自身氨基酸序列有关,还可能与cbm性质不同有关。
因此认为不是所有的cbm,只是某些cbm能增加酶的稳定性;另外,将cbm与催化活性结构域相连时,没有合适的连接肽也可能降低酶的稳定性。
所以需要进一步研究cbm对酶学性质的影响。
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3. 研究的基本内容与计划
内容:⑴构建连有不同家族cbm的木聚糖酶杂合酶;
⑵熟练掌握杂合基因在毕赤酵母中表达;
⑶比较分析不同家族cbm对木聚糖酶酶学特性的影响;
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4. 研究创新点
根据cbm亲和不溶性底物特性,将单一催化结构域连接cbm增加酶对不溶性底物的降解作用。
由于进化原因,不是所有木聚糖酶都含有cbm。
而本实验直接对木聚糖酶进行改造以测试不同家族cbm对木聚糖酶酶学性质的影响。
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