β-木糖苷酶的制备及重组内外切纤维素酶和内切木聚糖酶活性测定新方法开题报告

1. 研究目的与意义

市场上己出现β-木糖苷酶酶制剂，但由于产量低、成本高，酶有效性不高等问题而未得到广泛应用于商品中。运用基因工程和蛋白质工程手段生产低价高效的β-木糖苷酶产品己成为行业发展的迫切需要。本研究通过对重组毕赤酵母工程菌培养条件的优化，达到提高表达量的目的；并且进一步研究了β-木糖苷酶的酶学性质，为实现β-木糖苷酶高效表达做准备。同时将β-木糖苷酶与木聚糖酶协同作用以便更好的应用于各个领域中。

2. 国内外研究现状分析

β-木糖苷酶可与木聚糖酶协同作用，将木聚糖彻底分解，是木聚糖降解的关键酶之一。许多生物都能产β-木糖苷酶。高等植物中，MinicZ首次报道了双子叶植物（拟南芥）中β-木糖苷酶的特性。微生物中有Aspergillusarnonarius、Humicola.griseavarthermoidea等。但大多细菌和酵母主要产胞内β-木糖苷酶，但Aureobasidiumpullulans能产胞外β-木糖苷酶。目前国内外已报道的β-木糖苷酶的等电点多数为弱酸性，而从Fusariumverticilioides和Talaromycesemersonill中分离到的β-木糖苷酶的等电点分别为7.8和8.9。β-木糖苷酶的最适pH一般在3.0~5.0，较多研究表明真菌合成的β-木糖苷酶最适pH为弱酸性。β-木糖苷酶的最适反应温度范围较大，多数在40~60℃。而近年来，从一些嗜热细菌和耐热真菌中分离到的β-木糖苷酶都有较高的热稳定性和最适反应温度。

3. 研究的基本内容与计划

1.利用酵母工程菌制备β-木糖苷酶

2.利用β-木糖苷酶和内切木聚糖酶的协同作用测定酶活的方法的研究

3.重复试验结果，根据酶活的测定和高压液相来和以往的结果作对比

4. 研究创新点

首次创建β-木糖苷酶的基因工程菌并利用β-木糖苷酶测量木聚糖酶活力的新方法。