前列腺基质细胞DNA损伤分泌表型的药物靶向研究和机理探讨开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

肿瘤微环境(tumor microenvironment, tme) 是指由肿瘤细胞与其周围环境所组成的高度异质性的、且随着肿瘤发展而不断进化的微小生态系统。

它主要包括肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、细胞外基质(extracellular matrix, ecm)及其降解酶、多种细胞因子以及特殊的理化特征（如低氧、低ph）[1]。

肿瘤微环境组成部分对肿瘤细胞生长和侵袭的作用曾被认为是微不足道的，甚至只是一个旁观者，因此这一领域过去一直被药物研究领域忽视。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1．研究或解决的问题本课题对前列腺基质细胞DNA损伤后的分泌表型进行初步研究，寻找能有效阻滞DDSP（DNA损伤分泌表型）的发生发展的小分子激酶抑制剂，研究在基质细胞DDSP被显著抑制的前提下，癌细胞从微环境中获得的恶性表型(增殖、迁移和耐药等)是否可以被最大程度的降低。

2．拟采用的研究手段（1）使用米托蒽醌（MIT）、博来霉素或γ-射线处理前列腺衍生原代成纤维细胞，以 γ-H2AX的出现（免疫组化）证明细胞发生DNA损伤后，检测几种典型分泌蛋白表达水平的改变（即DDSP的出现）；（2）通过体外条件下使用p38抑制剂、PI3K/Akt抑制剂、mTOR抑制剂这三种不同类型的激酶特异性小分子化合物处理经历DNA损伤的成纤维细胞，运用qRT-PCR和Western blot检测细胞分泌蛋白的mRNA水平和蛋白质水平的变化，判断是否可以有效阻滞DDSP的发生发展；（3）在DDSP被显著抑制的前提下，使前列腺癌细胞处于成纤维细胞的条件培养基中，研究该癌细胞的增殖率、迁移率和抗药性等，能否恢复至处于正常成纤维细胞的条件培养基中的癌细胞状态。