一种鸟氨酸脱羧酶基因的克隆表达及合成1,4-丁二胺的研究开题报告

 2021-11-04 08:11

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

文献综述聚酰胺俗称尼龙,是一类含有重复酰胺基团的高分子聚合物,被广泛运用于各个领域。

尼龙46是其中一个重要品种,最早由carothers于1938年合成,直到上世纪90年代才有帝斯曼公司将其商品化,目前帝斯曼仍是全球范围内pa46最大的供应商。

pa46具有高耐热性、优良的高温刚性和耐蠕变性、优良的阻燃性、耐磨耗性、耐药品性、耐疲劳性等特性。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

待研究的问题:本课题拟构建一株高效表达鸟氨酸脱羧酶的大肠杆菌工程菌,优化该工程菌的脱羧酶表达工艺,建立鸟氨酸脱羧合成1,4-丁二胺的全细胞催化工艺。

拟采用的研究手段:通过基因工程手段,特异性扩增大肠杆菌e.coli mg1655基因组上的鸟氨酸脱羧酶编码基因spec,将其与诱导型表达载体pet28a相连构建表达质粒pet28a-spec,将其转化入表达宿主e.coli bl21(de3)中,构建大肠杆菌工程菌。

分别在不同温度下对该酶进行诱导表达,考察表达温度对工程菌产酶的影响,并对工程菌的一步脱羧催化反应条件进行优化,即考察温度、ph、底物浓度和辅因子plp对细胞催化活性的影响。

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