一种几丁质内切酶CmChi4的克隆表达及应用开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1.1几丁质的简介1.1.1几丁质几丁质是一种天然的含氮多糖类生物高分子，每年生物合成量约为100亿吨[1]，在自然界中含量仅次于纤维素[2]，是十分丰富的可再生资源，其分布较广,以虾蟹壳中含量最多[3]。

几丁质的分子式为(c8h13no5)n，是由单体n-乙酰氨基葡萄糖( glcnac)通过 β-1,4-糖苷键连接起来的多聚体，分子量大多在100万以上。

几丁质、纤维素及壳聚糖在化学结构上极为相似，仅是单体结构中2号位碳原子上的基团不同，纤维素的是羟基，壳聚糖的是氨基，而几丁质的则是乙酰氨基[4]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1 研究内容本课题将实验室保藏的一株产几丁质酶的菌株chitinolyticbacter meiyuanensis sybc-h1复苏培养，提取基因组基因，通过基因工程手段将几丁质内切酶基因cmchi4扩增，构建在pet-28a( )质粒上，并转至宿主大肠杆菌构建含重组质粒的重组菌株。

再对该基因进行诱导表达，通过ni2 亲和层析纯化该酶后对其进行酶学性质的研究，最后利用该酶降解几丁质。

2.2 拟研究手段2.2.1基因cmchi4的克隆将保藏的菌株sybc-h1复苏培养，获得菌液后利用基因组提取试剂盒提取该菌的基因组并验证。