1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题在茶叶发酵过程中采取一定的提取方法,提取茶叶中的聚酯型儿茶素,采用hplc的分析方法对其中的聚酯型儿茶素的含量进行定量分析。
20 世纪 50 年代,红茶化学研究的先驱roberts 首次在红茶发酵过程中,用双向纸层析方法分离出包括黄色色素 x 和 y、物质 a、物质 b、物质 c在内的 9 种不明物质[1],并且把黄色中性色素命名为茶黄素[2]。
聚酯型儿茶素(theasinensins,tss)是可以与茶黄素(theaflavins,tfs)相提并论的另一类儿茶素氧化产物(tanaka et al.,2005)。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题建立一种检测茶叶中tss的分析方法显得尤为重要。
tss 这类新物质的发现必然要进行定量分析,只有这样才能更好地为科研、茶叶生产等提供便利。
yoshino[1]用到一种 hplc 的测定方法,分析条件是:shodex c18-5a 柱(4.6 mm250 mm);无梯度洗脱,流动相为乙腈(15%)、含 0.1 mmoll-1na2edta 的 100mmoll-1磷酸(85%);流速为 0.5 mlmin-1;柱温为常温;检测器为电化学检测器。
3. 研究的方法与方案
1983 年 nonaka[1]等用茶鲜叶通过一系列工序分离出 tsa、tsb。
这种分离制备 tsa、tsb 的方法如下:80%丙酮提取茶鲜叶,保留滤出液;加入乙酸乙酯萃取,保留乙酸乙酯层过 sephadex lh-20 色谱柱,然后乙醇洗脱,保留最后一部分洗脱液;过 diaion hp-20 色谱柱,h2o 和甲醇作为洗脱剂,保留开始的一部分;再过 sephadex lh-20 色谱柱,以甲醇洗脱出来的就是化合物 tsa 和 tsb。
15.6 kg茶鲜叶,最后得到 7.6 g 的 tsa 和 2.0 g 的tsb。
4. 研究创新点
pan等[1]报道了用超高效液相色谱检测红茶中快速检测茶黄素的方法,但是超高效液相仪器较贵重,色谱柱也特殊,无法被普遍使用。
薛金金等[2]报道了tfs和tss同时检测的高效液相色谱(hplc)方法,该方法分离效果很好,但是对于tf2b和tfdg无法做到完美分离;本实验前期工作中有建立hplc法同时分析茶叶中儿茶素和tfs的方法,但是该方法实验时间偏长,不利于快速检测。
在研究报道的基础上,本实验建立了一种同时检测tsc、四种儿茶素和四种茶黄素单体的快速检测方法,以期为儿茶素、tfs和tss的同步快速检测奠定基础。
5. 研究计划与进展
2017年10月份进行实验的前期准备工作,主要包括实验试剂,实验仪器的准备,茶叶原料获取。
2017年11月-2018年3月 完成实验主体,主要包括聚酯型儿茶素的制备以及聚酯型儿茶素的hplc分析。
2018年4月实验收尾,主要包括所制取的聚酯型儿茶素的分子量和分子结构的分析等。
