1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1 研究意义卤化物广泛存在于自然生物体内，迄今为止，有约4700多种卤化代谢产物从生物体内分离出来，这些产物具有独特的生理和生物学特性。
但与生物体内卤化代谢相关的酶却知之甚少。
本课题旨在对卤化酶基因进行筛选、克隆，结合传统的抗菌活性筛选和抗菌相关基因检测，对卤化酶基因进行分析[1]。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究的目标本课题利用构建的珠穆朗玛峰土壤宏基因组文库，筛选获得含有卤化酶基因的阳性克隆，并对含有完整卤化酶基因簇的阳性克隆转化子在白色链霉菌中的异源表达。
2 研究内容本课题的主要内容是通过直接提取土壤微生物总dna，构建宏基因组文库，对功能基因进行重组表达和功能筛选，获取卤化酶目的基因，并对目的基因进行异源表达。
通过卤化对酶基因进行筛选、克隆，结合传统的抗菌活性蹄选和抗菌相关基因检测，分析具有产生次生代谢卤化物潜力的菌株。
3. 研究的方法与方案
1 研究方法根据卤化酶基因中同源基因设计简并引物，利用pcr扩增方法，对珠穆朗玛峰土壤宏基因组文库中的质粒进行初步筛选，再根据简并引物筛选得到的序列与ncbi上已知序列进行比对，对其结果正确的序列设计特异引物，筛选文库菌液，对已设计特异引物的珠峰宏基因组文库不同编号以其对应的菌液为模板，运用96孔板法，特异性筛选含有卤化酶基因的阳性克隆。
根据末端测序结果对可能含有完整卤化酶基因簇的阳性克隆经aan1酶切与制备的poj436连接，通过电转化的方法转入epi100后获得正确的单克隆。
对其单克隆培养后提取质粒转入感受态获得阳性转化子，对其转化子培养保菌。
4. 研究创新点
通过构建土壤宏基因组文库，与传统方法相比，扩大了对土壤微生物资源的利用，使得研究对象更为广阔。
通过珠穆朗玛宏基因组文库，利用卤化酶基因序列筛选包含完整基因簇的阳性克隆，为研究卤化酶相关课题提供了新思路。
5. 研究计划与进展
课题拟从2017年12月开始到2018年5月完成。
2017年12月-2018年4月文库质粒筛选、测序，并运用96孔板法进行筛选单克隆。
2018年5月整理分析数据，完成结题报告，并撰写毕业论文。
