1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题意义:放线菌是能够产生一些价值很高的生理活性物质,在医药、农业等领域有广泛的应用,它所产生的抗生素能够有效的防治农作物的某些病害。
用放线菌产生的农用抗生素防治植物病害具有无污染、无毒、无残留等优点。
虽然人们己经在放线菌中发现了大量的抗生素,但是目前发现的放线菌无论是数量和种类上都只占到很少的部分,土壤中还存在着大量的未发现的资源。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:通过对不同地方釆集的土壤进行放线菌的筛选,旨在得到具有抑菌活性的放线菌菌株,对分离自土壤的放线菌进行分类鉴定,提取基因组dna 后pcr扩增16s rdna,基因测序并进行同源性分析,构建进化树并进行系统发育分析,结合培养特征、生理生化特征,并对其进行进一步的研究。
内容:本研究采用培养特征、生理生化特征观察与分子生物学相结合的方法,利用高氏一号和lb两种培养基对来自崂山、中山陵、女山湖的土壤进行分离筛选,再进行鉴定。
提取菌株基因组dna 后,扩增16s rdna 基因片段并测序,测序结果在ezbiocloud数据库进行有效种的序列相似性搜索,下载与供试菌株16s rdna 序列同源性相近的菌株序列,利用clustalx 软件进行序列的多重比对,利用mega7.0 软件n-j(neighbor joining)方法构16s rdna 基因序列进化树。
3. 研究的方法与方案
研究方法:放线菌的分离筛选方法、菌种分子和形态鉴定、发酵分析产物。
技术路线:样品前处理稀释涂布挑取单菌落划线分离 富集 菌种保藏dna提取pcr扩增16s rdnata克隆 测序、序列的多重比对 根据进化树结果并结合培养特征、生理生化特征对菌株进行鉴定、发酵、产物分析。
实验方案:一、实验目的筛选具有抗菌性的放线菌二、实验原理高氏一号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。
4. 研究创新点
创新点:本实验以筛选到具有抑菌活性的放线菌为目标,筛选出目的菌株,再对其具有的不同于其他菌株的抑菌作用进行研究,丰富了放线菌的应用范围,为医疗工业等行业提供理论依据。
5. 研究计划与进展
研究计划: (1)本人负责进行资料收集、查询、整理,完成相关文献综述; (2)本人负责通过资料查询了解具有抑菌活性放线菌的相关理论知识; (3)本人通过和老师及师姐了解实验的可行性; (4)本人对查询和收集的资料进行整理分析,完成研究。
预期进展:2017年9月至12月完成菌株的筛选实验;2017年11月完成本课题的文献综述并提交;2018年1月至5月完成菌株鉴定和相关抑菌活性实验;2018年5月完成毕业论文;2018年6月为毕业答辩做好准备。
