1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一．柚皮素在各个领域的使用价值 柚皮素( naringenin)是柚皮苷的苷元，一种单体，属于二氢黄酮类化合物，主要存在于芸香科植物葡萄柚、西红柿、葡萄以及柑橘类水果中。
国内外药理研究表明，柚皮素具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗纤维化、抗癌、抗肿瘤、抗病毒、抗心律失常、镇咳、预防动脉粥样硬化、免疫调节脂肪代谢、抗衰老、保护肝功能以及类雌激素等多种药理活性，可被开发应用于医药、食品等领域。
柚皮素具有高效低毒的抗肿瘤潜能。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标： 提高柚皮素生物合成产量研究内容： 培养购买的肠沙门氏菌，提取其基因组，设计引物及酶切位点，将乙酰辅酶A羧化酶基因paacc从DNA上切割下来并用pcr技术扩增，再将paacc与T载体连接，导入JM109菌株培养，然后利用抗性物质AMP筛选出含T-paacc的菌株，再将paacc从T-paacc上切割下来与氯霉素抗性pacycduet-1连接，导入含ESI及CTNT4基因的BL21（DE3）菌株中，用含抗性物质clo的培养基培养，筛选出含A-PAACC的菌株，将含A-PAACC的BL21（DE3）表达菌株用发酵培养基培养观察其柚皮素的产量变化。
关键问题： 引物和酶切位点的设计；paacc基因的提取；paacc基因与载体的连接，paacc基因与pacycduet-1的连接；T-paacc以及A-paacc的导入；JM109菌株的培养；BL21菌株的培养；发酵培养基的设计与配置，菌株发酵培养条件的控制；菌株的接种及表达菌株的发酵。
3. 研究的方法与方案
将肠沙门氏菌中乙酰辅酶a羧化酶基因paacc通过基因工程技术转入bl21（de3）菌株中，来提高柚皮素生物合成产量。
1.购买肠沙门氏菌菌株。
2.将菌株扩大培养。
4. 研究创新点
1.目前柚皮素的生产方法比较： 植物提取法、化学合成法、生物合成法，本课题采用的是生物合成法。
植物提取法费时费力，得率甚微；化学合成法耗能大，而且会产生较多的化学污染，而生物合成法则显得绿色、经济。
2.大肠杆菌优势： 以大肠杆菌这一了解得较深入的菌株作为转化的宿主，可以经济有效地调控发酵条件，使得最终产物产量最大化3.基因前处理： 在基因转化前，对其进行一定的处理，有利于质粒的构建以及目的基因的表达。
5. 研究计划与进展
研究计划：2017.9-2017.10 学习sds-page电泳技术，掌握了解细菌基因组的提取技术，pcr技术和pcr仪的使用方法，液相色谱仪的操作；超净工作台、摇床、离心机、ph计、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计等仪器的使用方法。
2017.10-2017.11 配置与实验相关的试剂，购买缺少的材料，和生物公司进行联系，对缺少的需要借用的仪器进行预约。
2017.11-2017.12 进行预实验，熟悉培养基的配置，各种仪器的操作。
