1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.课题意义本课题通过分析酸奶中游离和结合态糖链结构的改变，以及酸奶中唾液酸的含量变化来研究嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、乳双歧杆菌和婴儿双歧杆菌这四种菌种发酵过程对奶中糖类营养物质的影响。
酸奶中的唾液酸和n链寡糖具有多种生物学功能，与婴幼儿智力发育和人体健康等有关，研究得出不同菌种发酵过程对酸奶中糖链的消化情况，为后续的酸奶研究提供理论数据。
2.国内外研究概况牛乳中含有众多的糖类，如单糖，双糖，寡糖和多糖等[1]。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标通过分析酸奶中游离和结合态糖链结构的改变，以及酸奶中唾液酸的含量变化来研究嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、乳双歧杆菌和婴儿双歧杆菌这四种菌种发酵过程对奶中糖类营养物质的影响，为后续的酸奶研究提供理论数据。
2.研究内容（1）将四种菌种复苏扩大并在牛奶中培养，获得酸奶；（2）分别测定四种酸奶样品中的唾液酸和n链寡糖含量，研究这四种菌种发酵过程对奶中糖类营养物质的影响；3.拟解决的关键问题（1）研究嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、乳双歧杆菌和婴儿双歧杆菌这四种菌种发酵过程对奶中n链寡糖的消化情况。
（2）研究这四种菌种发酵过程对奶中唾液酸的消化情况。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法（1）检测唾液酸：①结合态：取50mg酸奶于1.5ml离心管中，加50μl 0.2mm kdn以及1ml 2m hac，混匀后80℃金属浴3h，反应结束后快速冷却并离心取500μl上清至新离心管中，旋干；复溶在200μl 0.1m nacl中，静置2h，用1m naoh调节ph至中性，加入0.1m nacl至250μl，离心取50μl上清至新离心管中；加入20μl 10mg/ml opd溶液，80℃金属浴避光反应40min，反应结束后将样品迅速冷却至室温，离心取30μl上清进行检测。
②游离态：取50mg酸奶于1.5ml离心管中，加12.5μl 0.2mm kdn以及1ml去离子水，混匀后离心，取500μl上清至新离心管中，旋干；复溶在75μl 0.1m nacl中，静置2h，定容至125μl，取50μl上清至新离心管中；加入20μl 10mg/ml opd溶液，80℃金属浴避光反应40min，反应结束后将样品迅速冷却至室温，离心取30μl上清进行检测。
（2）检测n链寡糖：取50mg酸奶于1.5ml离心管中，加入50μl 40％ tca，震荡5分钟并离心去上清，将沉淀ph洗至中性；依次加入50μl 6m 尿素、78μl 蒸馏水、23μl 500mm ph7.0 磷酸缓冲液和12.5μl sds变性剂，混匀后100℃金属浴5min，冷却后再加入19μl 10％的triton-100水溶液和50μl pngasef，混匀后置于37℃隔水式恒温培养箱反应16h；用supelcleantm envi-carbtm预装柱进行纯化，旋干；加10μl 2ab溶液后65℃金属浴反应4h；每2μl 2ab标记的n链寡糖组加8μl acn混匀待测。
4. 研究创新点
特色或创新之处纵观目前的研究现状，总结分析可以发现目前国内并没有关于菌种发酵过程对乳中糖链结构影响的研究，关于酸奶的研究多集中于其口感和风味等方面。
本课题意在通过测定酸奶中唾液酸和N链寡糖的含量变化，来研究不同菌种发酵过程对奶中糖类营养物质的影响，为之后酸奶营养方面的研究提供理论数据。
5. 研究计划与进展
1.研究计划本课题拟于2017年10月开始，2018年5月完成。
2017.10-2017.11查阅国内外关于酸奶中的微生物、酸奶中的糖类与糖代谢以及糖链的检测方法等内容的文献，对牛乳发酵过程中糖代谢和测定唾液酸和n链寡糖含量方法的研究进展有大致的了解，并撰写文献综述。
2017.11-2018.1制定总体实验方案，学习基本操作并进行预实验。
