筛选宏基因组文库中的Ⅱ型聚酮开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义与前景：许多天然产物中的卤素取代基深刻影响着其生物活性，例如万古霉素，氯霉素，金霉素，瑞拜克霉素[1]。

譬如，瑞拜克霉素是由色氨酸衍生而来的吲哚咔唑家庭成员，能抑制拓扑异构酶i和ii[2]，能抑制蛋白激酶c而具有抗癌活性[3]，瑞拜克霉素的生物合成早期途径中，初始底物l-色氨酸首先在卤化酶rebh的作用下形成7-氯-l-色氨酸[4-5] 。

本次研究中，通过简并引物筛选宏基因组文库获得卤化酶相关基因，进而为设计特异引物筛选出包含卤化酶基因的单克隆，进一步研究产生具有生物活性的卤化物的潜力打下基础。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标与内容：通过简并引物筛选宏基因组文库获得卤化酶相关基因,将筛选出来的卤化酶基因成功导入感受态细胞中。

然后进行含卤化酶相关基因的单克隆筛选，确人相关的卤化酶基因得以转入成功。

拟解决的关键问题：首先得从基因文库中通过pcr成功的找到相关卤化酶基因，并与载体成功连接。

3. 研究的方法与方案

研究方法，技术路线以及实验方案：首先将基因文库中的质粒进行pcr，体系为质粒，dmso，左右引物,mix以及水补充到适当的体系，进行pcr。

将pcr后的体系进行跑胶。

胶为1%的胶，从中发现目的条带。

4. 研究创新点

宏基因组学技术是一种不依赖于微生物培养的技术，直接从环境样品中提取微生物全部遗传物质，与合适载体（连接，转化到宿主菌中建立宏基因组文库。

然后对文库进行分析与筛选，得到新的基因或生物活性产物。

突破了微生物的培养瓶颈，是极具潜力的新方法。

5. 研究计划与进展

研究计划：从基因文库中，通过pcr筛出相关卤化酶基因，然后通过电转化，将目的基因导入感受态菌内。

进行单克隆筛选出携带有卤化酶基因的菌。

预期进展：一个星期内筛选出卤化酶基因，然后做电转化单以及单克隆筛选。