1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1、研究意义在古细菌、细菌，特别是在真核生物膜结构中，蛋白质多以糖蛋白的形式存在，糖蛋白上的糖链在细胞识别、信号转导、分化发育、免疫应答等各种生命活动中起着重要的生物学作用[1, 2]。
然而由于糖链不是基因编码的直接产物、组成糖链的单糖种类较多、且相同单糖组成下糖苷键的连接位点和共价键类型又有变化，因此获取糖链的难度较大，且多需要借助工具酶实现。
n-糖酰胺酶（pngase）是糖蛋白n-连接糖基化研究中主要的工具酶，其作用是将糖链从所连接的蛋白质分子上释放下来以便进行后续分析，被广泛用于糖链结构信息、糖链结构与功能关系、糖链对糖蛋白功能的影响以及蛋白质结构分析等方面的研究。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题1、研究目标利用原核生物表达系统表达出新型的、不存在自身糖基修饰的n-糖酰胺酶，利用柱层析法对表达产物进行纯化，并分析该酶的生物化学性质，如酶促反应最适ph、最适温度和酶的底物特异性等酶学性质。
2、研究内容（1）新型n-糖酰胺酶的基因克隆、重组表达和蛋白质纯化。
（2）新型n-糖酰胺酶最适反应条件的研究。
3. 研究的方法与方案
1、研究方法重组质粒的制备与转化、目的基因的诱导表达、目标蛋白的分离纯化、酶促反应、高效液相色谱分析。
2、技术路线见附件图3、实验方案（1）对目的基因进行克隆重组，将重组质粒转入e.coli bl21 感受态细胞中。
（2）将重组细胞涂布至lb固体培养基，37 ℃静置培养14h。
4. 研究创新点
挖掘并定性研究了新型的N-糖酰胺酶PNGase Stca，综合了两种商业化N-糖酰胺酶的优点，其底物作用范围广，可应用于所有类型的N-链糖，可在原核系统中进行表达，且能避免自身降解的风险。
5. 研究计划与进展
1、2016.10-2016.11：利用e.coli bl21表达出新型pngase，并将其纯化。
2、2016.11-2017.3：对经纯化后的pngase进行实验分析，利用高效液相色谱法测定酶学性质。
3、2017.3-2017.4：撰写毕业论文。
