黑果枸杞花色苷的提取与抗氧化活性研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

多酚类物质包括花色苷、黄酮类化合物等，通过其较强的抗氧化清除自由基作用，表现出抗炎、保护心血管、抗肿瘤等多种生物活性，因此，许多富含花色苷等多酚类物质的植物如蓝莓、葡萄等已在国外得到了广泛开发利用。黑果枸杞作为近年来新挖掘的野生资源，富含花色苷等多酚类物质，且已有大量研究表明，该类物质是其发挥保健作用的重要物质基础，所以极具研究意义。

harman 提出衰老的自由基学说认为，随着年龄的增长，机体器官的衰退性变化是由自由基的副作用引起的，生物体在长期的进化中体内形成了自由基产生与消除的动态平衡，但内源性的抗氧化物防御机制并不能100％有效，膳食抗氧化剂对降低生命期间长期积累的氧化损伤更为有效和重要。

前期研究结果显示，黑果枸杞提取物具有良好的自由基清除能力。汪河滨等研究显示黑果枸杞色素对dpph自由基、羟自由基以及超氧阴离子自由基均具有良好的清除作用。李进等研究结果认为黑果枸杞叶黄酮增强小鼠血清羟自由基清除能力。陈晨等研究显示黑果枸杞的抗氧化能力指数为587μmole te/g。夏娜等研究显示，黑果枸杞多糖、黄酮和多酚提取物均具有一定的体外抗氧化活性，它们在清除o2-的能力弱于dpph自由基和oh，且整体上黑果枸杞总黄酮和总多酚的抗氧化能力强于总多糖。

2. 研究的基本内容和问题

将研究并寻找从黑果枸杞中分离纯化花色苷的有效方法，此方法具有提取效率高、重复性好、工艺温和等优点，并通过体外抗氧化实验验证制备的花色苷具有显著的抗氧化活性，即具有显著的DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力。

3. 研究的方法与方案

本实验利用ab-8大孔树脂柱层析制备黑果枸杞花色苷粗体物、akta purifier蛋白纯化系统纯化分离出花色苷单体（需要特定流动相）、ymc-pack ods-a色谱柱(20250mm，5m)分析检测单体结构成分。

dpph自由基清除能力测定方法 参照hu 等方法略做改动，用无水乙醇配制0.4mmol/l的dpph溶液，取一定浓度梯度（0.01、0.02、0.05、0.1、0.15、0.2、0.35、0.5mg/ml）的样品25μl与150μl的dpph溶液分别加入到96孔板，30℃条件下在暗反应30分钟，通过酶标仪测定反应体系在λ517nm处的吸光值。ic₅₀用来表示在吸光度517nm条件下清除率达到50%的样品浓度。

dpph自由基清除率（%）=[a₀- (a₁-a₂) ]/ a₀ 100%

4. 研究创新点

通过乙醇浸提，离心取上清液，真空浓缩，AB-8大孔树脂柱层析纯化，AKTA Purifier蛋白纯化系统与YMC-Pack ODS-A柱进一步分离纯化，冷冻干燥可使纯度高达97%以上。

5. 研究计划与进展

黑果枸杞花色苷单体的提取，纯化和制备需要花费一个月的时间，即从三月份初到四月份初，然后花色苷的抗氧化实验DPPH自由基清除能力测定和超氧阴离子自由基清除能力测定，再加上PC12细胞抗氧化性实验还需要一个月的时间，即四月份到五月份，最后就是结果的测定和分析，五月中旬完成论文的攥写。