1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
分子生物学方法克服了传统培养法的缺陷,在微生物多样性方面得到了越来越多的应用,微生物群落分子分析方法的基础,最重要的环节就是从样品中尽量毫无偏差地提取出高质量并具有代表性的微生物总基因组dna。目前,国内外许多学者对各种微生物进行了研究,本文对提取各种微生物总dna方法进行介绍。对提取的dna可进行分光光度测定、凝胶电泳检测或进行pcr特异性扩增检测等分析[1],为基因克隆表达研究奠定了基础。
而作为分子生物学研究的基础,所提取dna的浓度、纯度及片段大小,对后续pcr、克隆的效果产生了一定影响,理想的基因组dna提取方法不但要考虑dna提取得率,还要尽可能地减少dna的降解[2],以保证不同批次dna提取效率和质量的一致性。
对近几年国内外的各种dna提取方法进行比较后发现:简化实验步骤,用非有机溶剂法代替传统的有机溶剂法以减少污染,采用各种固体吸附剂有效去除pcr反应抑制剂以及降低成本,已成为提取细菌基因组dna的发展趋势[3]。
2. 研究的基本内容和问题
对豆腐酸浆微生物总DNA提取方法进行研究,并通过对不同方法进行分析,寻找适合该种微生物DNA提取的最适方法,有效、快速、经济地提取高纯度、高质量的细菌基因组DNA。
3. 研究的方法与方案
具体的实验步骤:
(1)豆腐酸浆的制备。
(2)用不同的方法进行微生物总dna的提取,找到最合适的方法。
4. 研究创新点
微生物群落分子分析方法的基础,最重要的环节就是从样品中尽量毫无偏差地提取出高质量并具有代表性的微生物总基因组DNA。
所提取DNA的浓度、纯度及片段大小,对后续PCR、克隆的效果有很大影响,有效、快速、经济地提取高纯度、高质量的细菌基因组DNA,仍是分子生物学研究的基本问题。
5. 研究计划与进展
2015.1-2015.2 阅读文献、查找实验资料。
2015.3-2015.5 进行实验,用不同方法提取DNA,进行比较,找到最合适的方法。
