1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.本课题的意义血小板衍生生长因子(platelet-derived growthfactor, pdgf)属于血管内皮生长因子家族,其活性的增强在癌症和白血病中具有重要意义[1],是动脉粥样硬化起始阶段的重要影响因素之一[2],也是肝星状细胞的最强促分裂因子[3]。
血小板衍生因子受体(pdgfr)分为α受体和β受体,pdgfrb即pdgfr中的β受体。
pdgfr 已经成为治疗肿瘤疾病的药物靶点[5]。
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2. 研究的基本内容和问题
研究的目标和内容:我们想通过运用ClonExpressTM同源重组克隆技术对PDGFRb基因进行克隆并表达,运用GST标签亲和层析技术得到较高纯度及质量的带GST标签的PDGFRb蛋白,这将有助于基于PDGFRb蛋白的抗肿瘤药物的开发和研究。
拟解决的关键问题:得到较高纯度及质量的PDGFRb蛋白
3. 研究的方法与方案
研究方法:基因克隆表达,蛋白纯化技术路线:克隆纯化实验方案:pdgfrb基因通过clonexpresstm同源重组克隆技术插入至gst-t3-28a的bamhi和hind iii位点中。
gst亲和纯化带gst标签的pdgfrb目的蛋白。
可行性分析:克隆:clonexpresstm同源重组克隆技术及相关试剂可以从vazyme公司处得到;gst-t3-28a可从实验室杨敏学姐处得到;本实验室相关仪器齐全。
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4. 研究创新点
使用clonexpresstm同源重组克隆技术,能高效,快速,方便的克隆基因。
使用gst亲和标签融合技术,并进行gst亲和层析。
我们希望能通过gst亲和标签融合技术得到高产量的目的蛋白,且希望通过gst亲和层析得到高纯度的目的蛋白。
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5. 研究计划与进展
2014年1月进行前期准备工作2月进行基因克隆3月进行蛋白纯化4月进行数据处理及论文写作
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