利用同源重组技术进行定点突变的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

对目标基因进行定点突变早已成为生物学研究过程中的一种常规策略，许多不同的定点突变方法被广泛的应用于基因的功能、调控、表达以及蛋白质的结构与功能的研究。

聚合酶链式反应(pcr )是于1986年报道的由mullis等人创建的一种对特定dna序列进行快速体外扩增的技术方法。

在其诞生之初，就开始有人将之应用于基因的定点突变。

2. 研究的基本内容和问题

目标通过实验结果证明利用同源重组技术进行定点突变的可行性。

内容本实验将质粒pet28a-n（质粒约8.3k）基因的43位丝氨酸突变为谷氨酰胺，即碱基gc变为碱基ca。

拟解决的关键问题对特异性引物的设计是本实验需要解决的首要问题。

3. 研究的方法与方案

本实验通过引物的设计、PCR扩增、Dpn1去甲基化、同源重组进行连接、质粒转入感受态细胞、质粒提取、测序等实验项目为主要研究方法。

技术路线和实验方案均经过大量的文献阅读以及对教师的咨询之后而确定的，均为以经实践的成熟技术和方法，所以实验操作、完成的可行性很高、得到期望实验结果的可能性很高，实验成功的可能性很高。

4. 研究创新点

利用同源重组原理与聚合酶链式反应（pcr）相结合的一种技术手段对基因进行定点突变是本实验课题的创新之处。

在实验过程中，通过对引物特别的设计，既引入了突变基因，又完成了同源序列片段的构建。

相对于重叠pcr（overlap pcr）进行定点突变的技术，本实验大大的简化了实验步骤，并且大大的提高了突变的阳性率。

5. 研究计划与进展

本实验计划在四月初进行，预计实验时间为一周，若得到实验预期结果，则进行数据分析；若实验结果与预期不符，则找到问题所在，调整实验方案再次进行实验，直至得到期望结论。

最后进行数据整理、分析、论文的写作。

预期本实验能在五月初完成，且在学校要求的时间限之前完成论文的写作。