解淀粉芽孢杆菌sRNA Bas18 缺失突变菌株的构建开题报告

全文总字数：985字

1. 研究目的与意义

解淀粉芽孢杆菌（bacillus amyloliquefaciens）fzb42是一株背景研究较为深入的革兰氏阳性pgpr（生存在植物根圈范围中，对植物生长有促进作用或对病原菌有拮抗作用的有益的细菌统称）。

在对fzb42的前期研究中，我们发现了一个新的有基因调节功能的非编码型srna bas18。

目前已知srna 对细菌的基因表达具有重要调节作用，但是我们对bas18的功能尚不清楚。

2. 国内外研究现状分析

随着生物信息学和实验技术的飞速发展，人们在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和霍乱弧菌等细菌中发现了150多种srna。

研究表明，大部分细菌srna与mrna相互作用来发挥调控功能。

作为一种新型的调节因子，srna能够帮助调节细菌的物质代谢、环境适应、群体感应、孢子形成和细菌毒力等。

3. 研究的基本内容与计划

我们将利用重叠pcr（lfh-pcr）对bas18进行敲除，用一段抗生素抗性基因sper取代bas18，进而对比fzb42菌株和突变菌株，研究小rna的表型功能

1、设计引物：重叠区域尽量避免富含at的序列。在片段合成过程中，接头区富含at的区域极易发生错配。同时在引物设计中，除了需要考虑一般pcr引物设计的问题外，在tm值的控制方面，所有引物最好拥有相同或者相似的退火温度tm，以便融合扩增的顺利进行；

2、获得fzb42菌株的bas18上下游同源序列和抗生素抗性基因；

4. 研究创新点

目前构建突变菌株的常用方法是构建质粒载体，人们在这方面的研究也颇为深入。但是利用重叠PCR构建突变菌株更快捷方便，人们对其的关注也越来越多。

与通过构建重组质粒载体不同，重叠PCR不需要内切酶消化和连接酶处理，利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变，操作简单。所以我们可以利用这个技术快速获得产物，可用于大片段基因的人工合成，且成功率非常高。