土壤微生物中替加环素耐药基因的挖掘开题报告

全文总字数：3871字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

抗生素耐药性是微生物的一种自然进化过程，但在近70年间，由于抗生素在医疗及养殖领域的大量使用甚至滥用，这一进化过程被大大加快，导致抗生素耐药性不断发展，在人类致病菌、动物致病菌、动物肠道传染病原体及人与动物共生菌中都出现了抗生素耐药性，并且由单一耐药性发展到多重耐药性。

2. 研究的基本内容和问题

本课题拟利用宏基因组学法从现有的土壤宏基因组文库中筛选替加环素耐药克隆，并通过生物学信息方法对阳性克隆插入cosmid中挖掘出耐药功能基因，并对其体内和体外活性进行确证。

选取替加环素作为筛选底物，用功能筛选的方法对文库中具有耐药表型的阳性克隆进行筛选；将阳性克隆进行酶切后构建其亚克隆，并筛选其中的阳性亚克隆；对阳性亚克隆进行序列测定，利用生物软件对序列进行分析比对，构建序列进化树；同时挑选特异性阳性克隆进行cosmid高通量测序，对全序列进行生物信息学分析，阐述基因功能；。本课题开展的关键问题在于如何克服利用耐药表型筛选耐药克隆的假阳性和重复性问题。

3. 研究的方法与方案

研究方法及方案：

1.耐药阳性克隆的筛选：对文库菌进行24孔板筛选，选出耐药阳性克隆；

4. 研究创新点

特色或创新之处：

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

1.研究计划