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1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
沙门氏菌在自然界分布广泛,尤其是在动物源性食品(如牛肉,家禽,蛋和乳制品)中,还包括被动物粪便污染或与动物接触的水果和蔬菜[1]。人群对沙门氏菌普遍易感,摄入被沙门氏菌污染的食物后十分容易导致食物中毒,中毒潜伏期较短,一般为48小时以内。主要症状为恶心呕吐、腹痛腹泻、发热、头晕乏力等,严重者出现脱水、休克,甚至死亡[2]。据美国疾病控制和预防中心统计,沙门氏菌每年造成超过一百万人感染,其中约23,000人需要住院治疗还有450人因此死亡[3]。沙门氏菌已经对公共健康造成了极大地威胁,为了对食品中的沙门氏菌进行更有效的检测、对沙门氏菌感染制定更加完善的预防控制措施,研究沙门氏菌的生长、粘附等基本生物学特性十分重要。
沙门氏菌是属于肠杆菌科的一种杆状革兰氏阴性菌[4],目前被分为2个种,即肠道沙门氏菌和邦戈尔沙门氏菌,其中肠道沙门氏菌又被分为肠道亚种(Ⅰ)、萨拉姆亚种(Ⅱ)、亚利桑那亚种(Ⅲa)、双相亚利桑那亚种(Ⅲb)、浩敦亚种(Ⅳ)和因迪卡亚种(Ⅵ)等5个亚种 [5]。通过特异性抗血清凝集沙门氏菌细胞检测脂多糖o抗原和鞭毛h抗原,根据o抗原和h抗原的不同又可将沙门氏菌划分为2000多种血清型[6]。
不同的沙门氏菌血清型在自然环境中的分布有不同的偏好[7]。simpson kelly m. j 等[8]对澳大利亚新南威尔士州从人类,食物,动物和环境中监测、诊断得到的49872个沙门氏菌分离物进行血清分型,一共得到325种血清型,绝大多数为鼠伤寒沙门氏菌。高付敏等[9]对上海市嘉定区2011—2014年生禽畜肉类沙门氏菌进行血清学分型,发现肠炎沙门氏菌检出率占比最高,其次是鼠伤寒沙门氏菌,随后是印第安纳沙门氏菌和德尔卑沙门氏菌,这四种血清型占到总数的四分之三以上。其结果与沈海燕等[10]对上海市从禽肉样本和活禽泄殖腔棉试子中分离鉴定得到的70株沙门氏菌血清型鉴定结果相似。另外,不同动物源沙门氏菌的优势血清型也有不同:李月华等[11]将分离自山东等6省份的194株鸡源和89株猪源沙门氏菌进行了血清型鉴定,结果显示鸡源沙门氏菌血清型以肠炎、婴儿和鸡白痢为主,猪源沙门氏菌血清型以鼠伤寒、肠炎、印第安纳和德尔卑为主,且根据统计学分析检验,两者优势血清型差异极显著;钟舒红等[12]对广西部分地区畜禽产品中的沙门氏菌进行血清型鉴定,发现在130株猪肉源沙门氏菌中德尔卑沙门氏菌占比最多,为36.15% ,其次是鼠伤寒沙门氏菌和伦敦沙门氏菌,占比均为占13.08%,而12株牛肉源沙门氏菌中主要血清型为德尔卑沙门氏菌,22株鸡肉源沙门氏菌中主要血清型依次为德尔卑沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌和肯塔基沙门氏菌,12株鸭肉源沙门氏菌中主要血清型则为德尔卑沙门氏菌(25.00%),鼠伤寒沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、伊斯坦布尔沙门氏菌及肠炎沙门氏菌均占16.67%。
2. 研究的基本内容和问题
本实验主要研究不同血清型沙门氏菌的生长和粘附性能,分析比较不同血清型之间的差异并分析其与致病性之间的关系。本实验拟解决以下两个关键问题:
1、测定66株不同血清型的沙门氏菌在相同生长条件下36个小时内的数量变化,得到各株沙门氏菌的生长曲线;
2、测定66株不同血清型的沙门氏菌在相同条件下孵育24小时和72小时后的粘附情况,判定各株沙门氏菌的粘附能力。
3. 研究的方法与方案
1、生长曲线绘制:
将稳定期菌液分别接种至新鲜tsb培养基中,调整菌悬液约浓度为3 log
cfu/ml;从每管各取400 μl菌液加入到仪器(bioscreen c微生物全自动生长曲线分析仪)专用的100孔板中,不接菌的tsb作为对照;将100孔板放置入板架上,设置测定温度为 37℃,测定间隔1 h,每次测定前震荡5 s,停顿10 s,震荡幅度中等;细菌生长进入稳定期后停止读数(36 h),根据结果绘制生长曲线。每个菌株重复8次。
4. 研究创新点
沙门氏菌不同血清型具有不同的致病能力,目前已有研究表明沙门氏菌致病性与其毒力基因有关,但还未有学者将沙门氏菌不同血清型的致病性与其本身的生长和粘附能力相联系。本实验的创新之处就在于研究不同血清型沙门氏菌在相同条件下的生长和粘附性能,比较这两种性能与致病性之间的关系,从而加深对沙门氏菌的研究进展,为预防沙门氏菌食物中毒提供新的思路。
5. 研究计划与进展
2018.10.22-2018.10.16 生长曲线绘制预实验
2018.10.27-2018.12.5 测生长曲线
2018.12.15-2018.12.18 粘附性能测试预实验
