黑果枸杞花色苷与BSA相互作用及其机理研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义：血清白蛋白是血液中含量最多的蛋白质。

它有分子量小、结构稳定的特性，具备贮运内源代谢产物和外源性小分子等重要生理功用，关于药物的药理药效施展具备重要作用。

大量文献表明，牛血清白蛋白关于研讨小分子体内代谢，确定药物的药代动力学和药效方面的性质，目前是最理想的蛋白模型。

2. 研究的基本内容和问题

项目研究目标及主要内容: 对黑果枸杞这一珍贵的药材中的含量最高的一种花色苷进行提取，获得该花色苷的纯品。

研究该花色苷与牛血清蛋白(bsa)生物大分子的结合作用，应用荧光色谱、紫外吸收光谱等方法对bsa与该花色苷的相互作用的淬灭作用类型、淬灭常数、表观结合常数、结合位点点数、结合空间距离、结合过程中热力学参数等机理参数进行研究，该研究能够提供黑果枸杞花色苷与bsa结合作用的基本信息，为黑果枸杞应用于药物筛选和与蛋白质作用规律提供佐证。

拟解决的关键问题:目前尚不能确定纯化后的花色苷是否能与bsa结合，需通过预实验进行验证。

3. 研究的方法与方案

（1）取黑果枸杞干以1:40料液比用体积分数80%乙醇（含0.1%甲酸）在50℃条件下水浴浸提3 h ；（2）将步骤（1）得到的离心上清液加入到旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸温度控制在45℃，旋蒸至较浓稠的紫黑色液体；（3）将步骤（2）的旋蒸液加10 ml上样于用AB-8大孔树脂填充的层析柱（530cm）；（4）将步骤（3）所得带有颜色的收集液集中到旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸温度为40℃，旋至较浓稠的紫黑色液体，用0.1%的TFA溶液稍加稀释；（5）将步骤（4）得到的旋蒸液过膜，通过高速逆流色谱法进行纯化，高效率的提取LRM单品花色苷。

（6）将步骤（5）所分离出的样品旋蒸，冷冻干燥即为高纯度的矮牵牛素-3-O-芸香糖（反式-香豆酰基）-5-O-葡萄糖苷；（7）将（6）所得到的花色苷纯品与BSA在不同温度（10℃，20℃，37℃）条件下结合30min, 于荧光光谱仪、紫外可见光光度计上检测，研究该花色苷是否与BSA结合，并研究其结合方式，得到淬灭常数、表观结合常数、结合位点点数、结合空间距离、结合过程中热力学等试验参数，阐述结合机理。

4. 研究创新点

目前，多酚与蛋白质的相互结合受到了研究者们的热切关注，涉及的领域也较为广泛。

提取黑果枸杞中含量最高的一种花色苷，通过与bsa的结合试验能模拟出该花色苷与人体血液的结合情况，可为药物筛选提供很高的参考价值，在此前人们对于黑果枸杞的了解并不多，关于此方面的论文数量也较少。

而改进了实验室原有的方法，采用高速逆流色谱法可以更高效率的提取样品，相比akta purifier蛋白纯化系统能提高纯化效率5倍以上。

5. 研究计划与进展

阅读国内外相关文献，规划讨论形成最终实验方案，总结实验关键点。

提前准备好黑果枸杞（原料）并将其放置在-18℃保存。

熟悉掌握akta purifier蛋白纯化系统、荧光色谱仪，紫外色谱仪傅里叶红外光谱等仪器设备，对所在院系没有的仪器提前到相关单位预约，保证实验顺利按时完成。