高二硫键还原能力角蛋白降解菌的筛选及酶学性质研究开题报告

 2022-01-23 20:34:42

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

目前,鉴于物理化学方法和微生物发酵降解处理角蛋白存在的不足,探索可高效、环保水解羽毛等角蛋白资源的生物酶解方法已成未来发展趋势。细菌、真菌、放线菌等多种微生物可降解角蛋白,其破坏角蛋白二硫键的假说较多,主要包括硫解理论[1]、物理压力理论[2]和酶解理论[3]等。近年来,二硫键还原酶在角蛋白降解中的作用日益受到关注。

因角蛋白氨基酸组成和维持空间结构化学键的特殊性与复杂性,决定了单一的微生物酶较难高效地彻底水解角蛋白。探明并获得微生物降解角蛋白的关键酶是实现角蛋白生物酶解的核心。角蛋白二硫键含量高,也是维持其高稳定性的关键化学键。因此,在微生物降解角蛋白过程中,参与打开二硫键的酶,可能是仅次于角蛋白酶的另外一种关键酶。若能够获得与 β-me、dtt 和gsh 等化学还原剂具有类似较强二硫键还原能力的微生物酶,对提高角蛋白的生物酶解效率,降低生产成本具有重要意义。同时,也可为进一步提高其他植物性蛋白质饲料资源利用效率提供新的思路。

1963年nickerson[3]等首次提出将具有降解角蛋白活性的酶称为角蛋白酶(keratinase)。角蛋白酶(keratinase)为专一性降解角蛋白的一类酶,可由真菌、细菌、放线菌等多种微生物产生[4-9]。某些菌以产生胞内酶为主,大部分菌以分泌胞外酶为主,霉菌一般既产生胞内酶又分泌胞外酶[10]

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:

1、从羽毛废弃物中筛选高二硫键还原能力角蛋白降解菌,并对其进行形态观察和分子鉴定。

2、选取三株筛选菌,进行指标测试,获得具有高二硫键还原能力的菌株。

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3. 研究的方法与方案

1、高二硫键还原能力角蛋白降解菌的筛选

样品前处理、富集培养角蛋白降解菌的分离角蛋白降解菌的初筛角蛋白降解菌的复筛菌株鉴定挑选三株菌进行角蛋白酶活性、二硫键还原酶活性、可溶性蛋白含量和巯基产量四个指标监测选取高二硫键还原能力好的菌株

2、酶学性质研究

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4. 研究创新点

目前,关于高二硫键还原能力角蛋白降解菌方面的研究内容不是很广泛,本实验旨在筛选具有高二硫键还原能力的角蛋白降解菌以及对其酶学性质进行研究,虽然只是浅层次的实验研究,但可以为高二硫键还原能力角蛋白降解菌酶学性质的深层次研究提供简单的参考。

5. 研究计划与进展

2016年10月-2016年12月 高二硫键还原能力角蛋白降解菌的筛选

2017年03月-2017年04月 高二硫键还原能力角蛋白降解菌酶学性质研究

预期:

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