土壤宏基因组文库中四环素耐药基因的筛选开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

土壤中复杂的微生物群和它抗生素所产生的高浓度的细菌使它有可能成为对多种抗生素的有耐药性决定因素。

除了细菌本身的因素，抗菌药物的广泛使用使细菌产生耐药性。

在过去几十年中，由于耐抗生素细菌感染患病比例急剧上升，产生了巨大的医疗和社会花销。

2. 研究的基本内容和问题

主要利用宏基因组学法挖掘土壤中新型抗生素耐药基因，并进行细菌对抗生素最小抑菌浓度MIC的测定，了解细菌对抗生素的敏感程度，为临床选药提供依据。

3. 研究的方法与方案

1、对文库菌进行24孔板筛选，选出耐药阳性克隆；2、用相应的文库菌进行摇菌，涂平板；3、挑平板上的单克隆进行摇菌；4，单克隆提质粒部分酶切，与载体连接，导入感受态大肠杆菌，再涂平板；5，挑平板上的亚克隆进行摇菌； 5.1亚克隆提质粒双酶切验证亚克隆插入片段的抗性；测序； 5.2按照倍比稀释法，进行细菌对抗生素最小抑菌浓度的测定；

4. 研究创新点

（1） 利用宏基因组学功能筛选的策略，筛选克隆新型耐药基因基因，为未来发掘新型耐药机制提供了理论及技术支持；（2） 环境微生物宏基因组文库的建立将会对未来其他功能基因的发掘及分析提供必要的平台。

5. 研究计划与进展

计划：对云南3#土壤文库菌1~2048 进行6中抗生素的筛选。

3月初：查阅资料，完成工作分配； 3月中 4月中：开题报告；对文库菌进行6种抗生素的24孔筛选及摇菌培养和保菌（阳性克隆）； 4月中4月底 ：中期检查；对阳性克隆进行第4步；分组进行第5.1 和第5.2步；5月初；撰写和提交论文，制作答辩ppt；5月底：论文答辩。

预期效果： 能筛选出适量的阳性克隆，较准确的测定mic值。