大叶冬青苦丁茶中咖啡酰奎尼酸类物质对糖代谢有关酶的抑制效果研究开题报告

 2022-01-29 19:03:08

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

苦丁茶是我国南部及西南部民间传统的药用植物。具有清热解毒、生津、提神、益智和抗衰老、调节血压和血脂等功效。黄林芳的研究表明,苦丁茶具有较为明显的减肥作用,服用后,反映机体肥胖程度的增长指标如李氏指数(肥胖指数)、体脂湿重等都有明显下降,认为苦丁茶对高脂营养性所致的小鼠肥胖有预防作用,对已形成肥胖的小鼠有治疗作用,且效果较明显。

苦丁茶冬青苦丁茶中的主要活性物质咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinicacids,cqa)是由奎宁酸和1-3个咖啡酸基团通过酯化缩合而成的酚酸类化合物。cqa是众多植物,如苍耳、金银花、咖啡豆、旋覆花、灯盏花、白花刺参以及山楂等的天然活性成分。cqa在自然界广泛存在,近年来,植物中cqa的生物活性的研究是当今热点问题,这方面的研究越来越多,如孙燕荣等[16]从传统中药旋覆花中提取到了1,5-di-cqa(1,5-o-二咖啡酰奎宁酸),通过体外肝细胞消化酶两步灌注法,研究了这种二咖啡酰奎宁酸物质对四氯化碳引起损伤的肝细胞的增殖、凋亡和细胞周期影响。实验证明,1,5-dicqa在7.8-250mg/l浓度范围内能够促进损伤的肝细胞增殖,并增强了细胞的活力、降低细胞上清中ast的活性,对细胞凋亡起到抑制作用,从而起到了明显的肝细胞保护作用。

un-hojin[17]从卫矛科植物中提取出活性多酚组分,纯化后使用nmr和fab-ms法鉴定出该活性组分中的主要物质:5-cqa(绿原酸),利用xtt检测法和酶谱法探究5-cqa对肝癌细胞hep3b的抑制机理,结果证明了5-cqa可以通过抑制基质金属蛋白酶的分泌而抑制肝癌细胞,从而推测出这种卫矛科植物的化学预防癌症功效可能来源于其中的5-cqa。

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2. 研究的基本内容和问题

主要是研究大叶冬青苦丁茶中咖啡酰奎尼酸类(包括6种单体:3,4-di-cqa、3,5-di-cqa、4,5-di-cqa、4-o-cqa、5-o-cqa及4-[3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基]-2,3-二羟基-2-甲基-丁酸。)对淀粉酶、葡萄糖苷酶活性的抑制效果及抑制类型,通过查阅相关资料,制定合适的试验方法,对每种单体都做浓度梯度测试,反复、多次进行,找出样品浓度和抑制效果的关系。

拟解决的关键问题

1.统计分析实验数据,考察样品对酶的抑制效果。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:以pnpg或淀粉天青为底物,用酶标仪测定生成的pnp含量来确定样品对酶活性的影响,以及样品抑制剂对酶活性的抑制率及抑制类型。

技术路线:通过实验试剂的配制,以及标准曲线的绘制,根据酶促反应动力学,从而确定抑制效果和抑制类型。

实验方案:

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4. 研究创新点

目前国内外很多研究表明苦丁茶具有很多对人体有益的活性成分,苦丁茶具有清热解毒、生津、提神、益智和抗衰老、调节血压和血脂等功效。尽管植物中咖啡酰奎宁酸物质的活性研究已成为热门,但是苦丁茶的咖啡酰奎宁酸研究有限。本项研究主要是针对六种咖啡酰奎宁酸物质对猪胰α-淀粉酶和葡萄糖苷酶的活性抑制效果和抑制类型的研究,能详细系统地比较出哪种单体的生物活性高,为今后进一步保健食品或药品的开发提供理论依据和理论指导。

此外,本实验通过科学严密的实验方法,将大叶冬青苦丁茶中咖啡酰奎尼酸类物质对糖代谢有关酶的抑制效果,通过后期数分析据处理,直观地显示出其抑制作用和抑制类型,多个样品和分组,反复多次实验,加上实验时间和温度上的严格掌控,使实验结果有充分的可信性。

5. 研究计划与进展

2013年12月通过查阅相关资料确定实验方案,准备实验所需材料和仪器。

2014年1月完成预实验,分析、改进实验方案,两周之内完成淀粉酶和葡萄糖苷酶抑制作用的动力学研究分析。

2014年2月至3月在之前的基础上进行抑制类型的实验部分,经过反复、多次实验,确定其抑制类型。

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