香菇中核苷酸含量测定方法的研究开题报告

 2022-01-29 07:01

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

核酸由许多的单体核苷酸通过3'-5'磷酸二酯键聚合而成,核苷酸在生物细胞中物质代谢和能量转换中有着多种多样的生物学功能[1]。随着分子生物学和制药工业的发展,核苷酸及其衍生物成为研究开发热点。而香菇素有菇中皇后的美誉,其味道鲜美,香气浓郁,而且营养丰富,有显著的药用及滋补作用[2]。香菇的独特风味是其广受喜爱的一大重要原因,游离氨基酸是主要的一类呈味物质,食用菌中另一类主要呈鲜物质为核苷酸,包括5'-amp(5'-腺苷酸)、5'-gmp(5'-鸟苷酸)、5'-ump(5'-尿苷酸)等,含量丰富,种类齐全。它具有很高的药用价值,可用于治疗冠心病、心肌梗塞及放射病[3]。因此测定香菇中的核苷酸,对香菇的综合利用具有理论与实际意义

目前国内外测定呈味核苷酸含量的方法主要有离子交换液相色谱法[4]、毛细管电泳法[5]和反相液相色谱法[6]等。反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术,主要是因为它适用于分析绝大多数的非极性物质和很多可离子化的化合物[7]。反相高效液相色谱法具有快速、操作简便的优点,是目前生物、食品等研究领域主要使用的方法。而香菇属于成分复杂的物质,其提取后除了目标物质以外其他的杂质偏多,故需要对香菇提取液进行纯化以方便测量含量。在香菇的纯化方面,离子交换层析法是普遍应用中的主要分离纯化方法[8]。因此,本实验采用反相液相色谱对香菇中的核苷酸的含量进行测定。

邹耀洪[9]釆用高效液相色谱-质谱法,对香菇中5'-核苷酸进行了分析,香菇中四种核苷酸的含量分别为5'-imp2.82 mg/g、5'-gmp7.05 mg/g, 5'-ump 4.25 mg/g. 5'-amp 6.51 mg/g;香菇煮汁中5'-gmp 的含量有 100 mg/100g 左右,金针菇21.1 mg/g[10];国外报导香菇浸出液中鸟苷酸的含量可达 4%以上[11];ana ranogajec[12]采用流动相条件为a:ph=5.8的磷酸缓冲剂;b:甲醇为0.4 ml/min的流率在254nm的条件下进行紫外检测;曹学增[13]等在c18柱上,以含0.05 %磷酸的水甲醇(95/ 5 ,v/ v) 为流动相进行了分离,检测波长260 nm;陈丽花[14]等采用c18 高效液相色谱柱,以甲醇与0.05mol/l kh2po4 溶液1:1(v/v)为流动相,梯度洗脱,能将其很好地分离。dad 检测器在260nm处检测,各呈味核苷酸的测定标准曲线在0.00~0.10mg/ml 的范围内呈很好的线性关系。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:

采用反相液相色谱对干香菇中的呈味核苷酸含量进行测定,完善已有方法,改进已有方法的不足之处,为相关标准的建立提供参考。

研究内容:

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3. 研究的方法与方案

研究方法

采取多次超声离心加盐的方法提取香菇中的核苷酸,提取液用阴离子交换层析进行纯化,最后采用反相液相色谱对核苷酸的含量进行检测。

技术路线

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4. 研究创新点

特色或创新之处:

1、通过超声提取以及残渣反复提取的方法,使香菇中的核苷酸尽可能多的溶解于提取液中;

2、为了确保离子交换树脂的吸附容量,进行吸附容量测试,使实验更为完善,结果更为可靠;

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5. 研究计划与进展

研究计划

1、对标样进行色谱条件的摸索,确定最佳分离ph;

2、进行香菇中核苷酸的提取试验

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