1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题的意义、国内外研究进展、应用前景等(列出主要参考文献)1.1本课题的意义小 rna(srna) 或非编码 rna( ncrna) 在原核生物和真核生物中广泛分布。
迄今, 在各种细菌中共发现超过 150 种 srna, 在大肠杆菌中发现了约 80 种 srna。
srna 通过与靶 mrna 配对而发生作用, 导致 mrna 翻译和稳定性的变化; srna 的功能涉及从结构调节到催化作用, 影响生物体内各种各样的加工过程, 一个单独的 srna 就能调控大量的基因并对细胞生理产生深远影响。
2. 研究的基本内容和问题
2.1研究的目标、内容本研究以肠炎沙门氏菌为研究对象,首先通过肠炎沙门氏菌在TB、MLTB、αTB三种不同培养基质的固液环境下的不同生长表现,通过转录组测序和λ-red同源重组法,选出6个表达差异较大的sRNA片段,挑除差异较大的基因组序列从而获得6种不同的菌株,我们通过测定菌体的生长曲线、菌体特性(泳动能力、自聚能力、表面疏水性)以及生物菌膜计数,从而探究非编码小RNA对沙门氏菌基本特性的影响。
2.2拟解决的关键问题: 我们通过沙门氏菌在TB、MLTB、αTB三种不同培养基质的固液环境下的不同生长表现来切除表达差异较大的小RNA序列,从而获得6种不同的菌株。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析3.1研究方法我们通过测定原沙门氏菌和挑除小rna后获得的新菌体的生长曲线、菌体特性(泳动能力、自聚能力、表面疏水性)以及生物菌膜计数,从而探究非编码小rna对沙门氏菌基本特性的影响。
3.2技术路线肠炎沙门氏菌培养表达→转录组测序→srna(6个)→λ-red同源重组法→6个新的沙门氏菌菌株→表达培养测定生长曲线、菌体特性(泳动能力、自聚能力、表面疏水性)以及生物菌膜计数3.3实验方案我们通过测定原沙门氏菌和挑除小rna后获得的新菌体的生长曲线、菌体特性(泳动能力、自聚能力、表面疏水性)以及生物菌膜计数,从而探究非编码小rna对沙门氏菌基本特性的影响。
3.4可行性分析本实验拟采用的主要技术是定量法中的平板计数法和分子生物学技术,这些实验方法和技术均较成熟,在文献中大多也采用此类方法,并且多数实验技术已在我们的研究工作中得到应用,因此本项目的实验方法与技术是可行的
4. 研究创新点
特色或创新之处sRNA与以往人们所熟悉的 mRNA、 tRNA、rRNA 等类型不同, 有其独特的性质和功能,但目前对其研究不多,我们可以通过切割肠炎沙门氏菌的sRNA然后让其表达,来探究sRNA的功能。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展4.1研究计划2017.811测定肠炎沙门氏菌的生长曲线和菌体特性。
2018.35测定肠炎沙门氏菌的生物菌膜计数。
4.2预期进展已经做完沙门氏菌的生长曲线和菌体特性实验。
