1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.研究意义
白果,又称银杏,是我国特有的药食两用坚果。白果具有降低血压,抗肿瘤,预防衰老等多种有益健康的药食功能,其营养价值越来越受重视。白果具有极大经济价值潜力,近年来市场上也不断出现各种新型白果制品。但白果不能多食,过量食用白果会致中毒,如白果中含有的银杏毒素能影响人的造血系统、消化系统、神经系统、皮肤系统。除了上述毒性之外,白果也具有致敏性,部分人食用白果后会出现过敏反应,如各种类型的皮炎皮疹、胃肠道不适症状等。
白果中除了小分子类物质如酚醇类物质能够引起过敏反应,白果中的蛋白类物质也具有一定的致敏作用。杨剑婷等从白果蛋白粗提物中发现了多种过敏蛋白参与了血清免疫球蛋白e(ige)介导的过敏反应,其中含量最高的为白果32k糖蛋白[1]。根据现有文献,食源性蛋白过敏源多为糖蛋白,如大豆致敏蛋白,花生致敏糖蛋白ara h1。同时有研究证明,糖蛋白上的糖链与ige介导的过敏反应有关,如花生致敏糖蛋白ara h1的糖链被证明是ige抗体识别的重要抗原表位[2]。由此可见,白果致敏蛋白上糖链也是一个重要的研究对象。本研究旨在鉴定白果糖蛋白的糖链结构以及探究该糖链在致敏机理中的作用。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
本研究旨在于定性定量分析白果糖蛋白中n-糖链的结构以及探讨其与致敏机制的关系。
2.研究内容
3. 研究的方法与方案
1.研究方法
1.1样品收集和蛋白提取物制备
从中国十个不同地区的当地市场购买新鲜银杏种子样本,产地包括:江苏泰兴,缩写为jstx;江苏邳州,缩写为jspz;云南昆明,缩写为ynkm;山东临沂,缩写为sdly;河北宿州,缩写为hbsz;广西桂林,缩写为gxgl;贵州六盘水,缩写为gzlps;甘肃徽县,缩写为gshx;四川青川,缩写为scqc;广东南雄,缩写为gdnx。
4. 研究创新点
1.首次对白果糖蛋白上的糖链进行结构分析分析,并分析了十个不同产地的白果N-糖链结构之间含量和结构的异同。
2.利用MALDI-TOF-MS一级和二级质谱对白果糖蛋白上N-糖链的结构进行了确证。
5. 研究计划与进展
1.研究计划:
2016.10-2016.11样品收集和蛋白提取物制备
2016.11-2016.12 蛋白的sds-page分析以及蛋白质印迹分析
