1. 研究目的与意义
| 糖尿病是当前威胁全球人类健康的最重要的非传染性疾病之一，根据国际糖尿病联盟统计，2011年全球糖尿病患者人数已达3.7亿，其中80%在发展中国家，估计到2030年全球将有近5.5亿糖尿病患者。度洛西汀是一种选择性的5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)再摄取抑制药。临床前研究结果显示，度洛西汀是神经元5-HT与NE再摄取的强抑制剂，对多巴胺再摄取的抑制作用相对较弱。体外研究结果显示，度洛西汀与多巴胺能受体、肾上腺素受体、胆碱能受体、组胺能受体、阿片受体、谷氨酸受体、GABA受体无明显亲和力。度洛西汀不抑制单胺氧化酶。度洛西汀可用于治疗糖尿病周围神经痛。 血浆蛋白结合率系指药物吸收入血液后，多数与血浆蛋白结合，治疗剂量的药物与血浆蛋白结合的百分率。在正常情况下，各种药物以一定的比率与血浆蛋白结合，在血浆中常同时存在结合型与游离型。而只有游离型药物才具有药物活性。当两种药物联合应用时蛋白结合能力较强的药物分子占领结合部位，使其他药物不能得到充分的结合，以致后者的游离部分增多，药效增强。这种相互作用对一些蛋白结合率较高的药物具有意义，因此要注意那些药效较强烈或毒性较大的药物，以防止药物自结合部位置换下来，使药效增强，常具有一定的危险性。 在糖尿病状态下机体的一些代谢酶和转运蛋白会发生变化临床上，糖尿病患者也往往伴随有心脑血管、肝脏或肾脏等器质性病变，甚至会有癌症的发生已有研究报道，科罗索酸和小檗碱在糖尿病大鼠体内的暴露量明显高于正常大鼠。（度洛西汀的血浆蛋白结合率约为96%，主要结合于白蛋白和 α1- 酸性糖蛋白）糖尿病状态下度洛西汀的药代动力学行为可能会发生改变，一旦血浆蛋白结合率稍有变化，便会对游离药物的浓度产生较大的影响，进而产生药效或毒性的改变。 |
2. 研究内容和预期目标
| 在糖尿病患者中，度洛西汀主要用于治疗糖尿病周围神经痛和伴糖尿病的抑郁症。在糖尿病病理状态下，机体的一些代谢酶和转运蛋白也会发生变化。临床上，糖尿病患者也往往伴随有心脑血管、肝脏、肾脏等器质性病变，甚至会有癌症的发生。研究表明度洛西汀在糖尿病模型大鼠体内暴露量显著高于正常大鼠，约是正常大鼠的2倍。 机体状态的改变也可能会影响血浆蛋白的结合律，度洛西汀血浆蛋白结合律很高，约为96%，血浆蛋白结合律的微小变化都可能会引起游离药物浓度比较大的变化，对度 |
| 洛西汀的药效和毒性均可能产生较大的影响。测定血浆蛋白结合率的方法有多种，包括平衡透析法、超滤法、微透析法等。平衡透析法虽然操作复杂且费时，但是分析成本低，而且可以有效的避免透析膜吸附引起的数据偏移，故本研究采用平衡透析法评价度洛西汀的血浆蛋白结合律。 |
3. 研究的方法与步骤
| 实验材料 度洛西汀(迈基生物,批号DHS151012Y,含量99%)，健康人和糖尿病人的血浆 实验处理 生物样品采集：离心后获得血浆样品，将血浆样品储存在约20℃下。 样本处理 ：吸取血浆样本( 或透析内液) 200 μL 至 1． 5 mL 塑料离心管中，加入内标工作液 50 μL，涡旋混匀后加入甲醇 610 μL 沉淀蛋白，涡旋 1 min，于 15 000 r ·min － 1 、4 ℃离 心 10min，吸取上清液 200 μL，进样测定。磷酸盐缓冲液( PBS) 样本: 吸取 PBS 溶液样本( 或透析外液) 250μL 至 1． 5 mL 塑料离心管中，加入内标工作液 50μL，涡旋混匀后吸取 200 μL，进样测定。 平衡透析装置： 将透析袋剪成每段 10 cm，加入含药血浆 1 mL，两端夹紧后悬于 PBS 缓冲溶液 19 mL中，使内外液面相平且透析袋不贴壁，于 4 ℃放置 测试方法 平衡透析并液质联用法：用平衡透析法处理血浆得透析内液和透析外液，以地西泮作为内标，色谱柱为 WATEＲS Xterra ＲP18( 4.6 mm ×100 mm，3.5 μm),以甲醇-水( 5 mmol·L － 1 醋酸铵-0． 3% 甲酸) 为流动相，梯度洗脱，用电喷雾离子源，正离子多反应监测。 数据处理与分析 计算分析血浆蛋白结合率（公式：药物血浆蛋白结合率=（C1-C2）/C1×100%,其中透析内液药物浓度C1，透析外液药物浓度C2）
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4. 参考文献
| 4．本课题主要参考文献 [1] Hasegawa Y, Kishimoto S, Shibatani N, Nomura H, Ishii Y,Onishi M, et al. The pharmacokinetics of morphine and its glucuronideconjugate in a rat model of streptozotocin-induced diabetes and theexpression of MRP2, MRP3 and UGT2B1 in the liver. The Journal of pharmacy andpharmacology. 2010 Mar;62(3):310-4. [2] 牛广豪,张全英,王猛猛,俞蕴莉,朱艺芳.度洛西汀在正常大鼠和糖尿病大鼠体内的药代动力学比较研究[J].药学学报,2017,52(05):790-794. [3] 王丽,刘克辛.常见肠、肝、肾疾病以及糖尿病状态下相关药物转运体的变化及其应用意义[J].药学学报,2015,50(02):127-132. [4] 成龙,申竹芳,孙桂波,孙晓波.糖尿病动物模型研究进展及在中药研究中的应用[J].药学学报,2015,50(08):951-958. [5] Lantz RJ, Gillespie TA, Rash TJ, Kuo F, Skinner M, KuanHY, et al. Metabolism, excretion, and pharmacokinetics of duloxetine inhealthy human subjects. Drug metabolism and disposition: the biological fateof chemicals. 2003 Sep;31(9):1142-50. [6] Chadha GS, Morris ME. Effect of Type 2 Diabetes Mellitusand Diabetic Nephropathy on IgG Pharmacokinetics and SubcutaneousBioavailability in the Rat. The AAPS journal. 2015 Jul;17(4):965-75. [7] Lee JH, Yang SH, Oh JM, Lee MG. Pharmacokinetics of drugsin rats with diabetes mellitus induced by alloxan or streptozocin: comparisonwith those in patients with type I diabetes mellitus. The Journal of pharmacyand pharmacology. 2010 Jan;62(1):1-23.
[8] 王猛猛, 张全英, 牛广豪, 俞蕴莉, 张全英. 平衡透析并液质联用法同时测定度洛西汀、氟西汀和阿戈美拉汀的人血浆蛋白结合率[J]. 安徽医药, 2017, 21(6):1001-1005. [9] 李瑞光, 陈历俊, 姜铁民. 应用平衡透析法分析药物小分子与蛋白质相互作用[J]. 生物技术通报, 2010(06):80-84. [10] Chadha GS, Morris ME. Effect of Type 2 Diabetes Mellitusand Diabetic Nephropathy on IgG Pharmacokinetics and SubcutaneousBioavailability in the Rat [J]. The AAPS journal, 2015, 17(4): 965-75. [11] Lee JH, Yang SH, Oh J M, et al. Pharmacokinetics ofdrugs in rats with diabetes mellitus induced by alloxan or streptozocin:comparison with those in patients with type I diabetes mellitus [J]. TheJournal of pharmacy and pharmacology, 2010, 62(1): 1-23. |
5. 计划与进度安排
1.2022-1-6至2022-3-12 接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告
2.2022-3-13至2022-4-21 研究测定血浆蛋白结合率的方法
3.2022-4-22至2022-5-10 糖尿病人和健康人血样样本血浆蛋白结合率的测定
