1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
现如今随着抗生素药物的大规模使用甚至滥用，导致大量耐药菌株在人类和动物体内产生，这些耐药菌株以及大部分抗生素可随着排泄物进入环境。
进入土壤后绝大部分抗生素原药及其代谢产物会迅速与土壤发生吸附作用，之后的直接决定其生物有效性，抗生素残留会带来的微生物的耐药性。
在水体、土壤、活性淤泥、动物体内均都发现大量抗生素耐药菌和耐药基因的存在[1]，耐药菌株和耐药基因的扩散已经影响到了人类健康，农业养殖等多个方面。
2. 研究的基本内容和问题
主要研究的内容是宏基因组文库中替加环素耐药基因的筛选，
3. 研究的方法与方案
.24孔板筛选培养基的配置：lb amp(100μg/ml ) chl(15μg/ml) 相应筛选浓度抗生素；筛选：在超净台中操作，先往500 ml纯液体lb培养基中加入500μl amp,250μl chl,195μl tig(此时tig工作浓度为2μg/ml，若为1μg/ml则减半)，再向处理好的24孔板依次向每个孔中加入1600μl培养基，然后向每个孔中加入30μl的菌液；培养：放到37℃培养箱中培养24-72h，观察文库菌生长情况；2．平板筛选经24孔板初筛之后，对在24孔板上的孔变浑浊的菌的编号涂平板。
取50μl菌液均匀涂布于添加了amp chl tig 的lb平板上，置于37℃培养箱中培养24-48h；挑取平板上长出来的阳性单克隆加入到添加了amp chl tig 的lb平板上相应筛选浓度抗生素的液体培养基中，放到37℃摇床培养24 h左右，取一部分菌液保存，一部分菌液提取质粒。
二、 耐药阳性亚克隆的构建1．载体制备（载体为pweb-tnc，大小为5.8k）载体制备包括载体的酶切和去磷酸化。
4. 研究创新点
替加环素是第一个甘氨酰环素类抗生素，其抗菌谱广，特别是对于多重耐药菌均有抗菌活性，为临床多药耐药菌感染提供一种新的治疗选择。
但是，某种抗生素经过宣传以后，大量使用，就会出现耐药性，耐药菌注定是要出现的，因此挖掘其耐药基因并对此基因片段进行分析以寻找新型的抗生素是十分必要的。
5. 研究计划与进展
2017年9月-2017年10月 确定实验选题2017年12月-2018年1月 搜索相关文献资料、写文献综述2018年2月-2018年3月 开题报告2018年3月-2018年5月 进行实验研究、撰写论文
