1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
漆酶( laccase,苯二醇: 氧 氧化还原酶,ec1.10.3.2) 是一种含铜的多酚氧化酶,是蓝铜氧化酶(bluecopperoxidase)家族中的一员[1],广泛存在于植物、真菌和细菌中[2]。
漆酶应用广泛,广泛应用在各种领域[3]。
在食品领域,漆酶在果汁澄清[4]、面粉烘焙、食品在线检测[5]、葡萄酒酿造、食品感官改善以及高附加值食品添加物生产等方面具有重要作用。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标及内容利用亲和层析法纯化死谷芽孢杆菌漆酶;利用纯化后漆酶催化壳聚糖接枝没食子酸改善壳聚糖的理化性质及抑菌性;用接枝后产物处理冷鲜肉,研究接枝后产物在冷却肉抑菌保鲜方面的应用。
2. 拟解决的关键问题2.2细菌漆酶催化壳聚糖接枝最适宜的反应条件的确定。
2.3 壳聚糖衍生物对冷却肉保鲜效果的验证。
3. 研究的方法与方案
研究方法利用亲和层析方法纯化实验室制细菌漆酶,在预实验测定的最适宜反应条件下利用纯化后细菌漆酶催化壳聚糖接枝没食子酸制备接枝产品,测定其抑菌性;用产品处理冷鲜肉,通过测定不同保存时间的冷鲜肉的感官、ph、色度等指标,判断接枝产品在冷鲜肉抑菌保险方面的效果。
2.技术路线实验室发酵细菌漆酶亲和层析纯化漆酶漆酶催化壳聚糖接枝没食子酸,制备产品接枝产品平板抑菌实验冷鲜肉分组处理分别测定冷鲜肉保存0天、2天、4天时的感官、ph、色度等指标3.可行性分析3.1立论可行漆酶改性壳聚糖也已经有不少的研究,壳聚糖的抑菌性已得到多个科研团队的证明,同时没食子酸、egcg等小分子物质也拥有抑菌能力,漆酶催化壳聚糖接枝小分子物质于理论上是可行的。
同时将改性后壳聚糖应用于冷鲜肉的抑菌保鲜方面,使得课题具有新颖性。
4. 研究创新点
1. 利用重组芽孢杆菌漆酶催化壳聚糖接枝反应,并将壳聚糖衍生物应用于冷却肉的保鲜。
5. 研究计划与进展
1. 研究计划2017.10 实验室发酵细菌漆酶,并进行初步纯化以备用2017.11-2017.12 利用亲和层析方法对粗纯化的漆酶进行精纯化,制备足够的纯化后漆酶以备用;进行预实验,设定多个反应条件梯度以及反应方式,确定漆酶催化壳聚糖接枝并制备接枝粉质产品的最适宜条件,为正式实验做准备2018.3-2018.4 正式开始实验,利用预实验确定出的反应条件进行漆酶催化壳聚糖接枝没食子酸、酚酸和egcg,并通过冷冻干燥技术制作粉末状接枝产物,在大肠杆菌、单増李斯特菌、枯草芽孢杆菌等细菌培养基上测定抑菌性能。
准备冷鲜肉分成a、b、c、d、m五组,分别为清水浸泡处理、壳聚糖处理、没食子酸加壳聚糖处理、没食子酸加壳聚糖加酶处理以及对照组,分别测0天、2天、4天、6天、8天和10天时每组肉的感官、ph、色度、t-bars等指标。
2018.5 进行数据处理,撰写论文准备毕业论文答辩。
