1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)聚酮类化合物是由聚酮类化合物生物合成途径合成的化合物的总称。
包括大环内酯类、四环素类、蒽环类、聚醚类等的化合物。
由于生物合成途径中构件的改变及其组合方式千变万化,可形成的化合物的数量极其庞大。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题本文研究的是二型聚酮单克隆发酵产物的分离提取,因此本实验的重点就是如何能够高效的提取出二型聚酮化合物。
实验中,需要将发酵后得到的二型聚酮单克隆发酵产物利用旋转蒸发仪进行初步提纯,获得发酵初提物,然后将发酵初提物过柱子进行最终的提纯。
由于本实验利用的是葡聚糖凝胶 sephadex lh-20法对发酵物进行分离纯化,所以葡聚糖凝胶柱和洗脱液是影响到二型聚酮化合物的提纯效率的重要因素。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析选择二型聚酮化合物生物合成基因的高度保守区域酮基合成酶结构域的简并引物以及合适的dna模板进行pcr扩增,然后将pcr产物进行进行纯化。
将已纯化的pcr产物导入到感受态细胞内,然后涂布于含氨苄青霉素抗性的lb培养基,37℃培养过夜。
最终筛选出阳性克隆产物。
4. 研究创新点
特色或创新之处目前,科学家对聚酮类化合物化合物的研究偏向于一型聚酮类,对于二型聚酮化合物的研究偏少,二型聚酮化合物作为聚酮类化合物的一大类,在聚酮类化合物中占有很大的比重,因此对于二型聚酮化合物的研究也会逐渐的多起来。
而且,科学家对二型聚酮化合物的研究也不在于如何能够快速的获得二型聚酮化合物,而是在于对二型聚酮化合物的药性方面进行研究,以便其能够尽快的应用到医药行业里,造福于人类的健康。
因此如何高效的获取更多的二型聚酮化合物也会逐渐的进入到科学家的视野中。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展(1)利用3-5天获得阳性的单克隆抗体;(2)利用3-5天对单克隆抗体利用R5培养基进行培养;(3)利用28-30天对R5和ISP4培养基混合后的培养基进行培养(一共4个批次,每个批次培养7天);(4)利用2-3天对培养过后培养基的树脂进行干燥,浸泡(甲醇)和蒸发(旋转蒸发仪),获得发酵初提物;(5)利用2天时间对发酵初提物进行葡聚糖凝胶过滤,最终获得纯的二型聚酮单克隆抗体;(6)利用2-3天对产物进行检测,讨论是否需要从新进行实验。
