1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1、课题意义白果作为我国特有的药食两用的一类坚果，因具有较高的经济价值，其开发前景受到越来越多的关注。
动物试验研究表明，白果具有提高肌体耐缺氧、抗疲劳以及延缓衰老的作用[1]。
但是白果也具有一定的毒性和致敏性，据实践经验及临床报道，生食白果或进食太多，会引起过敏反应，即使是煮熟的白果也不能过多食用。
2. 研究的基本内容和问题
1、研究目标通过对比检测白果蛋白和去n-糖链白果蛋白的免疫原性来研究n-糖链在白果蛋白致敏中发挥的作用。
2、研究内容（1）用dj pngase或bm pngase酶切消化白果蛋白，使其脱去n-糖链；（2）将白果蛋白和去n-糖链白果蛋白均分别用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶 胰蛋白酶消化得到六组白果蛋白样品；（3）采用蛋白质免疫印迹法检测六组白果蛋白样品的免疫原性。
3、拟解决的关键问题检测均分别经胃蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶 胰蛋白酶消化后的白果蛋白和去n-糖链白果蛋白的免疫原性，分析研究n-糖链在白果蛋白过敏反应中所发挥的作用。
3. 研究的方法与方案
1、研究方法（1）将30ml的浓度为1mg/ml的白果蛋白溶液在90℃水浴中加热搅拌变性，冷却至室温后加入dj pngase或bm pngase酶液，用磷酸-柠檬酸缓冲液调ph，加入dj pngase的样品ph调为4.0，加入bm pngase的样品ph调为5.5，然后置于37℃摇床中酶切反应48小时，中间测一次ph以确保最适ph不会发生较大变化。
48小时后，取适量样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，若目的条带消失，则表示n-糖链已被酶切去掉，再进行蛋白质免疫印迹，若目的条带的位置仍没有发生变化，则加入酶液并调ph继续消化，反复此步骤，直至完全脱去n-糖链。
（2）将白果蛋白分别用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶 胰蛋白酶消化，编号为1、2、3，去糖链白果蛋白做同样处理，编号为4、5、6。
4. 研究创新点
纵观国内外关于白果致敏性的研究，少有研究n-糖链在白果蛋白引起的过敏反应中所发挥的作用。
本实验从分子水平研究白果蛋白的致敏机理，研究结果或许能够为从根本上最大程度的消除或降低白果及白果制品的致敏性提供理论依据。
同时，在去糖链的多种方法中，酶解法作用相对温和，且效率更高。
5. 研究计划与进展
1、研究计划本课题拟于2017年9月开始，2018年5月完成。
2017.9-2017.10查阅国内外关于白果蛋白致敏性研究以及n-糖链在免疫反应中所起的作用的相关文献，并撰写文献综述。
2016.10-2018.11制定总体试验方案，学习基本操作并进行预实验，同时表达并纯化试验所需的酶。
