1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
苦丁茶作为一种茶的代用品，与茶叶一样在中国被广为饮用。而苦丁茶实际上是一类代茶用植物的统称，用于加工苦丁茶的植物原料有6个科11种之多，如冬青科的苦丁茶冬青、大叶冬青、枸骨和木犀科的女贞等，但主要原料为冬青科的苦丁茶冬青、大叶冬青和枸骨。苦丁茶中含有多酚类、皂苷、生物碱和黄酮类等生物活性成分，因而具有很好的抗氧化、降血压、降脂、抑菌等功效[1-3]。多酚类化合物是高等植物中普遍存在的次级代谢产物，具有广泛的生物活性。但是，有关苦丁茶多酚含量、种类以及抗氧化活性的研究较少[4-6]。刘丽香等[7-8]以苦丁茶冬青树叶加工而成的苦丁茶(苦丁茶冬青苦丁茶)为原料，采用folin-ciocalteu比色法测定了苦丁茶粗提物和各萃取物的多酚含量，并应用dpph法、teac法和frap法测定了粗提物和各萃取物的抗氧化活性，结果表明苦丁茶提取物具有较高的多酚含量和较强的抗氧化能力。张文芹等[9]比较了苦丁茶冬青苦丁茶及大叶冬青苦丁茶提取液的多酚、黄酮含量及体外抗氧化能力，结果表明两者均具有较强的体外抗氧化活性。关于苦丁茶多酚类化合物的组成，梁月荣等[10]通过分析浙江省大叶冬青苦丁茶中的化学成分发现苦丁茶中含有儿茶素和芦丁等多酚类化合物，而negishi等[11]报道了大叶冬青等冬青科树叶中含有绿原酸(5-cqa)、3,4-o-二咖啡酰基奎尼酸(3,4-di cqa)和4,5-o-二咖啡酰基奎尼酸(4,5-di cqa)等c q a类化合物。
1 苦丁茶多酚类物质的主要成分
多酚类化合物是高等植物中普遍存在的次级代谢产物，具有广泛的生物活性。刘丽香等[8]以苦丁茶冬青树叶加工而成的苦丁茶(苦丁茶冬青苦丁茶)为原料，采用 folin-ciocalteu比色法测定了苦丁茶粗提物和各萃取物的多酚含量，结果表明苦丁茶提取物具有较高的多酚含量。
2. 研究的基本内容和问题
1.双咖啡酰奎宁酸的提取工艺的选择。
cqa提取工艺的选择，在cqa的分离鉴定过程里极其重要，好的工艺能尽大可能的提高cqa的溶解以获得高的收率。在cqa的提取工艺上，常有以下模式：1.浸渍法。即将原料用适当的试剂在常温或温热条件下浸泡出有效成分的一种方法，此方法时间长达几个小时以上。2.煎煮法。指用水作溶剂，将被提物加热煮沸一定时间，以提取其有效成分的一种常用方法，时间长。3.色谱分离法。它利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相做相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。
本实验通过浸提、过滤、浓缩、干燥得到多酚粗提物，粗提物经大孔树脂hp-20分离纯化，再通过逆流色谱分析得到cqa单体,确定最佳的逆流色谱纯化体系。
3. 研究的方法与方案
1.制备cqa
粗提物的制备。称取适量苦丁冬青苦丁茶叶，加入料液比为1:10的沸水并于95℃水浴中浸提30min，5000g离心10min，上清液经浓缩、冷冻干燥得到粗提物。
初步分离纯化。将粗提物用去离子水配制成10g/l的溶液，上样(5ml)于hp-20大孔树脂层析柱(5cm30cm)，层析柱用纯水与70%乙醇各洗脱3个柱床体积，流速1.0m l/min，紫外与hplc检测，收集相应的洗脱液，并浓缩、冷冻干燥，得到色素及三种cqa。
4. 研究创新点
茶多酚提高动物免疫活性方面能发挥重要作用，但以往研究大多针对绿茶中的儿茶素等多酚，对苦丁茶茶多酚研究较少。我们将对苦丁茶中的多酚化合物双咖啡酰奎宁酸（CQA）进行分离纯化，以人类肠道上皮细胞（Caco-2）做为模型，考察CAQ对脂多糖（LPS）诱导的炎症的影响。
5. 研究计划与进展
2016年11月-12月
通过浸提、过滤、浓缩、干燥得到多酚粗提物，粗提物经大孔树脂hp-20分离纯化，再通过逆流色谱分析得到cqa单体,确定最佳的逆流色谱纯化体系。
2017年3月-4月
课题毕业论文、开题报告、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
