1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1. 意义单增李斯特菌是食源性疾病的主要病原菌之一，能导致败血症、脑膜炎等严重疾病。
且该菌能在较低温度下生存繁殖，因而控制其对食品的污染在实际生产中非常重要。
国内外学者常用体外细胞作为模型研究食源性病原菌的粘附特性，但体外细胞具有不能发育分化缺少细胞异质性，缺少粘蛋白产生细胞，缺少某些代谢酶等局限性，故对小肠上皮组织结构功能的模拟有一定差异。
2. 研究的基本内容和问题
4. 研究目标、内容4.1研究目标单增李斯特菌侵染的小鼠隐窝类器官的形态变化 4.2研究内容 本实验将小鼠隐窝细胞作为新的体外模型，利用该组织器官最大程度还原肠道内不断更新的环境系统，模拟出小肠上皮的结构与功能。
通过单增李斯特菌与小鼠隐窝细胞在体外的相互作用，观察单增李斯特菌的侵袭部位及组织器官的形态变化。
5. 拟解决的关键问题①单增李斯特菌的荧光标记包括荧光染料的选择、染剂用量及浓度的确定、加入染剂后孵育条件的确定 ②小鼠小肠上皮隐窝细胞的分离培养及体外模型构建 利用分离出的小鼠小肠隐窝干细胞为基础建立起体外模型，这类体外模型与肠道环境更为接近，从而研究观察单增李斯特菌对肠道干细胞的侵附作用。
3. 研究的方法与方案
6. 研究方法（1） 菌种活化1株单增李斯特菌的活化：2%接种量接种于bhi（脑浸膏）培养基中37℃培养过夜，活化2次后使用。
（2） 荧光标记活化后的细菌在4500r/min条件下离心5min，弃上清，用1ml ph=7.4的pbs重悬，每管加入一定量的染料后，37度孵育一段时间，3500rpm 离心2-3min，弃上清后用ph=7.4的pbs重悬，重复上述离心过程至上清液无明显颜色即可。
（3） 小鼠隐窝干细胞分离培养将小鼠颈椎分离后取出空肠和回肠段，放入预冷的pbs中。
4. 研究创新点
创新之处要建立更适合的体外细胞模型，肠道干细胞可能是一种新的思路。
肠道干细胞是一类具有持续增殖分化能力的细胞，主要位于肠黏膜隐窝内，其与肠道黏膜上皮的更新和修复密切相关。
肠道干细胞的克隆生成能力强，能够在需要时快速增殖，在正常机体内，肠黏膜损伤后依然存活的干细胞可加快分裂恢复数量并分化重建正常肠道结构，即肠道干细胞能够提供与正常机体更接近的肠道内结构。
5. 研究计划与进展
10.研究计划及预期进展研究计划 2016年5月-7月：查阅相关文献，了解李斯特菌的特性；并初步熟悉实验室2016年9月-10月：学习小鼠小肠隐窝细胞的分离及传代培养2016年11月-2017年1月：李斯特菌荧光染色实验，建立适宜的实验方法和条件2017年3月-4月：侵附实验，显微镜观察类器官形态变化2017年4月-5月：实验数据处理并撰写论文预期进展目前已完成了前期的资料准备工作，根据国内外文献和指导老师的指导初步设计了实验方案与技术路线。
至2016年10月，已经掌握了小鼠肠道隐窝细胞系的分离传代培养方法、基本特点和对实验条件的要求。
2016年11月-2017年3月间先后进行了多次单增李斯特菌的荧光标记实验。
