1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
一、本课题的意义、国内外研究概况、应用前景1.1 研究意义高等真菌近年来愈来愈引起人们的重视,从中不断发现结构新颖和具有显著生物活性的化合物,凝集素是其中极其重要的药理成分,其生物学功能、生理进程对生物工程研究和医学免疫研究有着重要的意义,已成为继研究蘑菇多糖之外的另一活性物质而被加以研究开发[1]。
硫磺菌是具有重要食用及药用价值的真菌,含有多种生物活性成分,可对人体起到重要的调节作用[2]。
其中,硫磺菌凝集素具有细胞凝集作用、细胞毒作用、免疫作用等生理活性,在医药疾病、农业等领域有着广阔应用前景。
2. 研究的基本内容和问题
二、研究的目标、内容和拟解决的关键问题2.1 研究目标本研究为通过优化硫磺菌凝集素的提取条件、产品脱色、纯化、活性鉴定等步骤,从硫磺菌中分离纯化出具有一定纯度与活性的凝集素,并初步检测其化学性质。
2.2 研究内容1、硫磺菌凝集素提取的单因素实验及优化。
以硫磺菌比活力作为考察指标,对提取工艺参数包括浸提液种类、料液比、提取时间、提取温度、浸提液ph、离子强度等进行优化,找到一条行之有效的最佳提取工艺路线。
3. 研究的方法与方案
三、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析3.1 凝集素凝集活性的检测凝集素的凝血活性的检测多以红细胞悬浮液为介质、以红细胞凝集程度为标准,一般检测方法如附件图3-1所示,其中,pbs缓冲液亦可视效果更换为生理盐水或alsevers液(血球缓冲液)等;体系体积亦可视效果调整至25μl。
凝集反应结果示意图如附件图3-2所示。
表示兔血红细胞全部在孔底沉淀; 表示大部分兔血红细胞在孔底沉淀,在沉淀周围有少量的兔血红细胞凝集素; 标示兔血红细胞凝集形成片层,但是凝集素面积较小; 表示兔血红细胞凝集形成片层,面积略多于 ; 表示兔血红细胞凝集形成片层,均匀分布在反应孔中,或者其边缘出现花边样的皱缩。
4. 研究创新点
四、特色或创新之处根据国内外关于菌菇凝素的研究进展可知,国内外虽不乏菌菇凝集素分离提取的相关研究报道,但针对硫磺菌凝集素的分离提取及性质研究,本实验实属首例。
本实验通过参考其他菌菇凝集素的提取分离过程,结合硫磺菌中所含生物活性物质及具体产物性质等因素,制定相关研究实验方案,以期获得关于硫磺菌凝集素提取的相关实验结果。
5. 研究计划与进展
五、研究计划及预期进展2016.3.5-2016.3.31 完成提取工艺参数的单因素实验与优化2016.4.1-2016.4.20 完成凝集素粗品的脱色纯化以获得纯品2016.4.21-2016.5.10 完成对硫磺菌凝集素性质的初步研究计划在6月份之前完成所有试验,并处理完试验结果。
